CAJ | 학술논문

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和EUSA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出,E39(306TEKFSFAKNPVDTGHG320)、EA5-l(355VTNPFVATSSA366)、FA8-1(377FGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明,E39为具有病毒中和活性的抗原表位.试验结果为进一步分析JEVE蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.
류행성을형뇌염병독(Japanese encephalitis virus,JEV)시일충엄중위해인축건강적충매병독.표면낭막단백(E단백)시해병독적주요결구단백.E단백재개도병독여숙주세포적흡부、융합,결정병독적혈응활성、세포기성이급결정병독독력화유도숙주산생보호성면역반응중기중요작용.E단백결구역Ⅲ(EⅢ)시유도중화항체적중요구역.위학정을형뇌염EⅢ적항원표위,실험수선극륭료JEV역묘주SA14-14-2적EⅢ구역,병용pGEX-6P-1재체진행융합표체,면역인적분석표명,해융합단백능피항JEV혈청식별.위료진일보대해결구역진행항원표위작도,설계료14개복개해구역차부분중첩적단태.장각단태여GST진행융합표체여순화.단태융합단백경JEV양성혈청면역인적화EUSA면역반응성소묘분석,결과감정출,E39(306TEKFSFAKNPVDTGHG320)、EA5-l(355VTNPFVATSSA366)、FA8-1(377FGDSYIV384)화E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4개선성항원표위.분별장4개항원표위융합단백면역소서,제비각항원표위단인자혈청,결과경체외병독중화시험표명,E39위구유병독중화활성적항원표위.시험결과위진일보분석JEVE단백결구여공능이급진단시제화표위역묘적연구제공료중요공작기출.