细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
5期
471-474
,共4页
刘惠荣%曾武威%周冰%申乐%吴刚%薛红%陈保生
劉惠榮%曾武威%週冰%申樂%吳剛%薛紅%陳保生
류혜영%증무위%주빙%신악%오강%설홍%진보생
胆固醇酯转运蛋白%原核表达%抗血清
膽固醇酯轉運蛋白%原覈錶達%抗血清
담고순지전운단백%원핵표체%항혈청
目的:克隆人胆固醇酯转运蛋白(CETP)eDNA序列,利用大肠杆菌表达人CETP,制备兔抗人CETP的多克隆抗血清.方法:采用RT-PCR方法,将人CETP基因克隆到pET-30b(+)上,构建CETP原核表达载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备CETP抗血清,以ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定.结果:SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CETP基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为4 h.将切胶纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶5.12×105.Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示,抗血清可以与CETP原核及真核表达蛋白特异结合.结论:成功地将CETP进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗人CETP抗血清,为进一步研究CETP的结构与功能奠定了基础.
目的:剋隆人膽固醇酯轉運蛋白(CETP)eDNA序列,利用大腸桿菌錶達人CETP,製備兔抗人CETP的多剋隆抗血清.方法:採用RT-PCR方法,將人CETP基因剋隆到pET-30b(+)上,構建CETP原覈錶達載體併轉化大腸桿菌,IPTG誘導錶達,切膠純化蛋白後免疫傢兔,製備CETP抗血清,以ELISA、Western blot、細胞免疫熒光方法對抗血清效價及特異性進行鑒定.結果:SDS-PAGE分析錶明,經IPTG誘導,CETP基因在大腸桿菌BL21(DE3)的包涵體中高效錶達,最佳誘導錶達時間為4 h.將切膠純化的蛋白免疫傢兔,ELISA法測定的抗血清效價為1∶5.12×105.Western blot及細胞免疫熒光檢測結果顯示,抗血清可以與CETP原覈及真覈錶達蛋白特異結閤.結論:成功地將CETP進行瞭原覈錶達併製備瞭高效價、高特異性的兔抗人CETP抗血清,為進一步研究CETP的結構與功能奠定瞭基礎.
목적:극륭인담고순지전운단백(CETP)eDNA서렬,이용대장간균표체인CETP,제비토항인CETP적다극륭항혈청.방법:채용RT-PCR방법,장인CETP기인극륭도pET-30b(+)상,구건CETP원핵표체재체병전화대장간균,IPTG유도표체,절효순화단백후면역가토,제비CETP항혈청,이ELISA、Western blot、세포면역형광방법대항혈청효개급특이성진행감정.결과:SDS-PAGE분석표명,경IPTG유도,CETP기인재대장간균BL21(DE3)적포함체중고효표체,최가유도표체시간위4 h.장절효순화적단백면역가토,ELISA법측정적항혈청효개위1∶5.12×105.Western blot급세포면역형광검측결과현시,항혈청가이여CETP원핵급진핵표체단백특이결합.결론:성공지장CETP진행료원핵표체병제비료고효개、고특이성적토항인CETP항혈청,위진일보연구CETP적결구여공능전정료기출.
