海洋与湖沼
海洋與湖沼
해양여호소
OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA
2008年
5期
455-461
,共7页
王兵%桂朗%李富花%相建海
王兵%桂朗%李富花%相建海
왕병%계랑%리부화%상건해
中国明对虾%消减文库%基因芯片
中國明對蝦%消減文庫%基因芯片
중국명대하%소감문고%기인심편
以中国明对虾WSSV感染6h的头胸部组织为实验材料,提取总RNA分别进行正反向抑制性PCR cDNA消减杂交,消减杂交后的PCR产物经纯化并克隆到T载体,进而转化成正反向消减文库.消减文库库容分别为:正向库,3.7×104;反向库,1.2×104.利用消减文库的克隆构建了cDNA表达谱芯片,共有1536个靶点,其中正、反向文库各768个.使用该cDNA芯片对WSSV感染后6h的对虾组织进行了表达谱分析,对其中80个出现明显表达调控变化的阳性克隆进行了测序.结果显示,在WSSV感染后6h,病毒基因开始大量表达,而宿主糖酵解,嘌呤、嘧啶代谢以及精氨酸代谢等代谢途径的关键基因出现明显下调.这表明病毒已在宿主体内大批量复制并开始抑制宿主代谢.病毒上调表达的WSV482可能与病毒毒力的增强有关,而宿主蛋白的管家基因如Actin,EFα的下调表达提示:在利用基因表达技术研究WSSV病毒的实验中,管家基因的选择要十分慎重.此外,根据作者已有的研究结果,TPI基因是比较好的候选管家基因.而WSV414、WSV215和WSV482是对WSSV进行RNA干涉实验较好的候选靶标基因.
以中國明對蝦WSSV感染6h的頭胸部組織為實驗材料,提取總RNA分彆進行正反嚮抑製性PCR cDNA消減雜交,消減雜交後的PCR產物經純化併剋隆到T載體,進而轉化成正反嚮消減文庫.消減文庫庫容分彆為:正嚮庫,3.7×104;反嚮庫,1.2×104.利用消減文庫的剋隆構建瞭cDNA錶達譜芯片,共有1536箇靶點,其中正、反嚮文庫各768箇.使用該cDNA芯片對WSSV感染後6h的對蝦組織進行瞭錶達譜分析,對其中80箇齣現明顯錶達調控變化的暘性剋隆進行瞭測序.結果顯示,在WSSV感染後6h,病毒基因開始大量錶達,而宿主糖酵解,嘌呤、嘧啶代謝以及精氨痠代謝等代謝途徑的關鍵基因齣現明顯下調.這錶明病毒已在宿主體內大批量複製併開始抑製宿主代謝.病毒上調錶達的WSV482可能與病毒毒力的增彊有關,而宿主蛋白的管傢基因如Actin,EFα的下調錶達提示:在利用基因錶達技術研究WSSV病毒的實驗中,管傢基因的選擇要十分慎重.此外,根據作者已有的研究結果,TPI基因是比較好的候選管傢基因.而WSV414、WSV215和WSV482是對WSSV進行RNA榦涉實驗較好的候選靶標基因.
이중국명대하WSSV감염6h적두흉부조직위실험재료,제취총RNA분별진행정반향억제성PCR cDNA소감잡교,소감잡교후적PCR산물경순화병극륭도T재체,진이전화성정반향소감문고.소감문고고용분별위:정향고,3.7×104;반향고,1.2×104.이용소감문고적극륭구건료cDNA표체보심편,공유1536개파점,기중정、반향문고각768개.사용해cDNA심편대WSSV감염후6h적대하조직진행료표체보분석,대기중80개출현명현표체조공변화적양성극륭진행료측서.결과현시,재WSSV감염후6h,병독기인개시대량표체,이숙주당효해,표령、밀정대사이급정안산대사등대사도경적관건기인출현명현하조.저표명병독이재숙주체내대비량복제병개시억제숙주대사.병독상조표체적WSV482가능여병독독력적증강유관,이숙주단백적관가기인여Actin,EFα적하조표체제시:재이용기인표체기술연구WSSV병독적실험중,관가기인적선택요십분신중.차외,근거작자이유적연구결과,TPI기인시비교호적후선관가기인.이WSV414、WSV215화WSV482시대WSSV진행RNA간섭실험교호적후선파표기인.
