中国男科学杂志
中國男科學雜誌
중국남과학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANDROLOGY
2010年
10期
12-15,24,封4
,共6页
朱晔敏%刘悦%郭强苏%匡昉哲%丁之德
硃曄敏%劉悅%郭彊囌%劻昉哲%丁之德
주엽민%류열%곽강소%광방철%정지덕
ERp57%原核表达%蛋白定位%精子%卵子
ERp57%原覈錶達%蛋白定位%精子%卵子
ERp57%원핵표체%단백정위%정자%란자
目的 克隆大鼠ERp57基因、原核表达蛋白并进行纯化,最终在大鼠精子和卵细胞中进行鉴定及定位.方法 运用RT-PCR从SD大鼠睾丸组织的总RNA中克隆大鼠ERp57 cDNA,构建ERp57原核表达质粒[pET-28a(+)/ERp57]并转化E.coli的BL21菌株,IPTG诱导蛋白表达,经Ni-NTA树脂亲和层析得到纯化的ERp57蛋白.随后,通过SDS-PAGE、Western blot和酶联免疫吸附等实验对重组蛋白进行鉴定,并利用获得的蛋白免疫家兔制备多抗.最后,利用Western blot和间接免疫荧光定位的方法研究ERp57在精子和卵细胞中的定性和定位.结果 成功获得纯化后重组的大鼠ERp57蛋白,并证实大鼠成熟精子和卵细胞都存在ERp57蛋白.ERp57主要定位于附睾尾部精子头的内侧,项体反应后定位于精子头的赤道区:卵母细胞则定位在细胞表面.结论 通过对大鼠ERp57基因的原核表达和抗体的制备可为后续进一步研究该蛋白在受精过程中作用奠定实验基础,而ERp57在精卵细胞中鉴定和定位的结果表明它可能与精卵融合过程相关.
目的 剋隆大鼠ERp57基因、原覈錶達蛋白併進行純化,最終在大鼠精子和卵細胞中進行鑒定及定位.方法 運用RT-PCR從SD大鼠睪汍組織的總RNA中剋隆大鼠ERp57 cDNA,構建ERp57原覈錶達質粒[pET-28a(+)/ERp57]併轉化E.coli的BL21菌株,IPTG誘導蛋白錶達,經Ni-NTA樹脂親和層析得到純化的ERp57蛋白.隨後,通過SDS-PAGE、Western blot和酶聯免疫吸附等實驗對重組蛋白進行鑒定,併利用穫得的蛋白免疫傢兔製備多抗.最後,利用Western blot和間接免疫熒光定位的方法研究ERp57在精子和卵細胞中的定性和定位.結果 成功穫得純化後重組的大鼠ERp57蛋白,併證實大鼠成熟精子和卵細胞都存在ERp57蛋白.ERp57主要定位于附睪尾部精子頭的內側,項體反應後定位于精子頭的赤道區:卵母細胞則定位在細胞錶麵.結論 通過對大鼠ERp57基因的原覈錶達和抗體的製備可為後續進一步研究該蛋白在受精過程中作用奠定實驗基礎,而ERp57在精卵細胞中鑒定和定位的結果錶明它可能與精卵融閤過程相關.
목적 극륭대서ERp57기인、원핵표체단백병진행순화,최종재대서정자화란세포중진행감정급정위.방법 운용RT-PCR종SD대서고환조직적총RNA중극륭대서ERp57 cDNA,구건ERp57원핵표체질립[pET-28a(+)/ERp57]병전화E.coli적BL21균주,IPTG유도단백표체,경Ni-NTA수지친화층석득도순화적ERp57단백.수후,통과SDS-PAGE、Western blot화매련면역흡부등실험대중조단백진행감정,병이용획득적단백면역가토제비다항.최후,이용Western blot화간접면역형광정위적방법연구ERp57재정자화란세포중적정성화정위.결과 성공획득순화후중조적대서ERp57단백,병증실대서성숙정자화란세포도존재ERp57단백.ERp57주요정위우부고미부정자두적내측,항체반응후정위우정자두적적도구:란모세포칙정위재세포표면.결론 통과대대서ERp57기인적원핵표체화항체적제비가위후속진일보연구해단백재수정과정중작용전정실험기출,이ERp57재정란세포중감정화정위적결과표명타가능여정란융합과정상관.
