渔业科学进展
漁業科學進展
어업과학진전
MARINE FISHERIES RESEARCH
2011年
4期
126-133
,共8页
陈大玮%邓利%何凡%邱聪龄%马一见%刘志刚
陳大瑋%鄧利%何凡%邱聰齡%馬一見%劉誌剛
진대위%산리%하범%구총령%마일견%류지강
抗菌肽%Piscidin%基因克隆%原核表达%棕点石斑鱼
抗菌肽%Piscidin%基因剋隆%原覈錶達%棕點石斑魚
항균태%Piscidin%기인극륭%원핵표체%종점석반어
以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus uscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列.Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60％～95％之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly.NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaara piscidin-like peptide (ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioides Piscidin-like peptide(ACE78291)以高达81％的支持率聚为一支.也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列.推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈a螺旋构型.将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis(EF),并在大肠杆菌 E.coli Origami(DE3)中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在.
以簡併引物通過RT-PCR從重要經濟海水魚類棕點石斑魚Epinephelus uscoguttatus白細胞中擴增齣一條388bp具有完整編碼框的cDNA序列.Blast分析初步顯示,該序列屬于魚類抗菌肽Piscidin傢族的一員,將其命名為棕點石斑魚Piscidin樣肽(GU592793),推導氨基痠序列具有界定魚類Piscidin的以下共同特徵:(1)預測的信號肽序列與其他Piscidin的同源性較高,在60％～95％之間;(2)推測的成熟肽N耑6箇氨基痠殘基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8箇和第13箇氨基痠位點均為Gly.NJ進化樹分析錶明,該cDNA推導的氨基痠序列與赤點石斑魚Epinephelusakaara piscidin-like peptide (ACE78290)、斜帶石斑魚Epinephelus coioides Piscidin-like peptide(ACE78291)以高達81％的支持率聚為一支.也錶明本研究成功剋隆到棕點石斑魚首條PiscidincDNA序列.推測的成熟肽為兩親性暘離子肽,等電點12.48,Schiffer-Edmunson預測其二級結構呈a螺鏇構型.將推測的成熟肽序列亞剋隆至pET-32a構建融閤錶達載體pET-32a-pis(EF),併在大腸桿菌 E.coli Origami(DE3)中成功錶達齣融閤蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃進行誘導錶達,4h可穫得大量錶達,目的蛋白以包涵體形式存在.
이간병인물통과RT-PCR종중요경제해수어류종점석반어Epinephelus uscoguttatus백세포중확증출일조388bp구유완정편마광적cDNA서렬.Blast분석초보현시,해서렬속우어류항균태Piscidin가족적일원,장기명명위종점석반어Piscidin양태(GU592793),추도안기산서렬구유계정어류Piscidin적이하공동특정:(1)예측적신호태서렬여기타Piscidin적동원성교고,재60％～95％지간;(2)추측적성숙태N단6개안기산잔기부함Phe、Ile급His;(3)성숙태제8개화제13개안기산위점균위Gly.NJ진화수분석표명,해cDNA추도적안기산서렬여적점석반어Epinephelusakaara piscidin-like peptide (ACE78290)、사대석반어Epinephelus coioides Piscidin-like peptide(ACE78291)이고체81％적지지솔취위일지.야표명본연구성공극륭도종점석반어수조PiscidincDNA서렬.추측적성숙태위량친성양리자태,등전점12.48,Schiffer-Edmunson예측기이급결구정a라선구형.장추측적성숙태서렬아극륭지pET-32a구건융합표체재체pET-32a-pis(EF),병재대장간균 E.coli Origami(DE3)중성공표체출융합단백,이1mmol/ml IPTG우30℃진행유도표체,4h가획득대량표체,목적단백이포함체형식존재.
