畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
7期
69-72
,共4页
殷玉和%李莹莹%刘新涛%吴丛梅
慇玉和%李瑩瑩%劉新濤%吳叢梅
은옥화%리형형%류신도%오총매
犬干扰素α%原核表达%纯化%生物学活性
犬榦擾素α%原覈錶達%純化%生物學活性
견간우소α%원핵표체%순화%생물학활성
本研究合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段,分别与温度诱导表达载体pBV220和化学诱导表达载体pET20b连接,构建了pBV220-CaIFN-α和pET20b-CaIFN-α重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21,通过温度诱导和IPTG诱导表达,CaIFN-α蛋白表达量分别为25％和20％.对比两方法诱导表达结果,确定最佳诱导方法为温度诱导.表达菌经超声破碎、变性、复性、疏水层析和分子筛层析后,得纯化的CaIFN-α蛋白,纯度约为96％.利用MDCK(犬肾细胞)-VSV(水疱性口炎病毒)体系,测定纯化后CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107 U/mg.
本研究閤成瞭編碼CaIFN-α蛋白的基因片段,分彆與溫度誘導錶達載體pBV220和化學誘導錶達載體pET20b連接,構建瞭pBV220-CaIFN-α和pET20b-CaIFN-α重組錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21,通過溫度誘導和IPTG誘導錶達,CaIFN-α蛋白錶達量分彆為25％和20％.對比兩方法誘導錶達結果,確定最佳誘導方法為溫度誘導.錶達菌經超聲破碎、變性、複性、疏水層析和分子篩層析後,得純化的CaIFN-α蛋白,純度約為96％.利用MDCK(犬腎細胞)-VSV(水皰性口炎病毒)體繫,測定純化後CaIFN-α蛋白的生物學比活性為3×107 U/mg.
본연구합성료편마CaIFN-α단백적기인편단,분별여온도유도표체재체pBV220화화학유도표체재체pET20b련접,구건료pBV220-CaIFN-α화pET20b-CaIFN-α중조표체질립,전화대장간균BL21,통과온도유도화IPTG유도표체,CaIFN-α단백표체량분별위25％화20％.대비량방법유도표체결과,학정최가유도방법위온도유도.표체균경초성파쇄、변성、복성、소수층석화분자사층석후,득순화적CaIFN-α단백,순도약위96％.이용MDCK(견신세포)-VSV(수포성구염병독)체계,측정순화후CaIFN-α단백적생물학비활성위3×107 U/mg.
