CAJ | 학술논문

背景与目的:核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性.本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB:着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响.方法:采用RT-PCR技术扩增的XPBcDNA 5′端一段69～520 bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3.1/His.将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞.单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况.MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性.结果:酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功.RT-PCR显示转染细胞XPBmRNA表达水平下降.以4.0μg/ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制.MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义.结论:构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPB mRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础.
배경여목적:핵감산절제수복궤제시세포수복손상DNA적중요도경,종류세포적내약상반수DNA손상수복기인표체증강,채취반의책략강저세포적DNA손상수복능력가이증가종류세포적약물민감성.본연구의구건능재포유동물세포중표체XPB반의RNA적표체질립pcDNA-XPB/AS(XPB:착색성간피병B기인),병초보탐토기대폐암세포DNA손상수복능력급항종류약물내약성적영향.방법:채용RT-PCR기술확증적XPBcDNA 5′단일단69～520 bp적서렬피반향삽입표체질립pcDNA3.1/His.장해중조질립순시전염폐암A549세포.단세포응효전영(SCGE)비교아매소유도적전염전후세포DNA손상수복정황.MTT법검측전염전후세포대아매소적민감성.결과:매절도보분석화기인측서증실반의표체질립구건성공.RT-PCR현시전염세포XPBmRNA표체수평하강.이4.0μg/ml아매소유도세포DNA손상,SCGE현시전염세포수복DNA손상능력수도억제.MTT현시미전염세포여전염세포대아매소적민감성존재차별,단무통계학의의.결론:구건적반의표체질립능하조전염세포XPB mRNA표체,억제세포DNA손상수복능력,위진일보연구XPB기인공능전정료기출.