中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2004年
3期
67-72
,共6页
陈工%马晓骊%陈虹%王欣%黄秉仁
陳工%馬曉驪%陳虹%王訢%黃秉仁
진공%마효려%진홍%왕흔%황병인
重组人血管内皮生长因子%甲醇营养型酵母表达体系%氨基酸顺序测定
重組人血管內皮生長因子%甲醇營養型酵母錶達體繫%氨基痠順序測定
중조인혈관내피생장인자%갑순영양형효모표체체계%안기산순서측정
为获得重组人血管内皮生长因子,采用重叠PCR扩增出含Kozak顺序、α因子前导肽和hVEGF 121的融合基因,经DNA测序无误后,插入Pichia pastoris酵母载体,并体外构建4拷贝表达单元质粒pAO815-4KαVEGF 121.表达载体转化酵母宿主菌GS115,筛选出高效表达hVEGF的转化子.摇瓶培养并1%甲醇诱导80h的VEGF分泌性表达量可达30mg/L.表达产物经S-Sepharose离子交换层析纯化后测活表明表达产物二聚体具有良好生物活性.SDS-PAGE分析、Western印迹表明表达产物具有适宜的分子量和抗原性.VEGF蛋白经氨基端氨基酸测序证实纯化后的不同糖化程度产物为同一蛋白质,但均为氨基端缺失了4个氨基酸的全长为117个氨基酸的VEGF.
為穫得重組人血管內皮生長因子,採用重疊PCR擴增齣含Kozak順序、α因子前導肽和hVEGF 121的融閤基因,經DNA測序無誤後,插入Pichia pastoris酵母載體,併體外構建4拷貝錶達單元質粒pAO815-4KαVEGF 121.錶達載體轉化酵母宿主菌GS115,篩選齣高效錶達hVEGF的轉化子.搖瓶培養併1%甲醇誘導80h的VEGF分泌性錶達量可達30mg/L.錶達產物經S-Sepharose離子交換層析純化後測活錶明錶達產物二聚體具有良好生物活性.SDS-PAGE分析、Western印跡錶明錶達產物具有適宜的分子量和抗原性.VEGF蛋白經氨基耑氨基痠測序證實純化後的不同糖化程度產物為同一蛋白質,但均為氨基耑缺失瞭4箇氨基痠的全長為117箇氨基痠的VEGF.
위획득중조인혈관내피생장인자,채용중첩PCR확증출함Kozak순서、α인자전도태화hVEGF 121적융합기인,경DNA측서무오후,삽입Pichia pastoris효모재체,병체외구건4고패표체단원질립pAO815-4KαVEGF 121.표체재체전화효모숙주균GS115,사선출고효표체hVEGF적전화자.요병배양병1%갑순유도80h적VEGF분비성표체량가체30mg/L.표체산물경S-Sepharose리자교환층석순화후측활표명표체산물이취체구유량호생물활성.SDS-PAGE분석、Western인적표명표체산물구유괄의적분자량화항원성.VEGF단백경안기단안기산측서증실순화후적불동당화정도산물위동일단백질,단균위안기단결실료4개안기산적전장위117개안기산적VEGF.
