CAJ | 학술논문

目的:克隆获得与mL52新基因(GenBank:AY028425)同源人类新基因hGlyrichin,并研究其功能.方法:采用PCR法从人胎肝cDNA文库中扩增出该新基因,因富含甘氨酸而命名为hGlyrichin,以RT-PCR和Northern杂交分析在多种细胞株中的表达及转录本大小,并对该基因进行生物信息学分析,利用pET22b表达载体构建重组质粒pET22b-hGlyrichin,转化大肠杆菌BL-21(DE3)中进行IPTG诱导表达.结果与结论:电子PCR证实该基因定位于人染色体20q11.22,包含3个外显子和2个内含子.Northern杂交结果显示为单一转录本,大小约600 bp,与mL52全长cDNA长度相符.所编码的蛋白为含有疏水区的小分子阳离子蛋白,相对分子质量和等电点分别为8 182.83和9.58,二级结构(Garnier-Robson模型)预测是以β折叠型为主,这些特点与目前已知的大多数阳离子抗菌肽的结构及部分理化特性极为类似,该基因转化后的大肠杆菌在IPTG诱导表达时的生长受到明显抑制,初步证实了hGlyrichin具有明显的抗菌活性.
목적:극륭획득여mL52신기인(GenBank:AY028425)동원인류신기인hGlyrichin,병연구기공능.방법:채용PCR법종인태간cDNA문고중확증출해신기인,인부함감안산이명명위hGlyrichin,이RT-PCR화Northern잡교분석재다충세포주중적표체급전록본대소,병대해기인진행생물신식학분석,이용pET22b표체재체구건중조질립pET22b-hGlyrichin,전화대장간균BL-21(DE3)중진행IPTG유도표체.결과여결론:전자PCR증실해기인정위우인염색체20q11.22,포함3개외현자화2개내함자.Northern잡교결과현시위단일전록본,대소약600 bp,여mL52전장cDNA장도상부.소편마적단백위함유소수구적소분자양리자단백,상대분자질량화등전점분별위8 182.83화9.58,이급결구(Garnier-Robson모형)예측시이β절첩형위주,저사특점여목전이지적대다수양리자항균태적결구급부분이화특성겁위유사,해기인전화후적대장간균재IPTG유도표체시적생장수도명현억제,초보증실료hGlyrichin구유명현적항균활성.