华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
2006年
3期
331-335
,共5页
薛秀兰%林菊生%宋宇虎%蔡晓坤%周鹤俊
薛秀蘭%林菊生%宋宇虎%蔡曉坤%週鶴俊
설수란%림국생%송우호%채효곤%주학준
瘦素%肝星状细胞%小干扰RNA
瘦素%肝星狀細胞%小榦擾RNA
수소%간성상세포%소간우RNA
目的构建具有特异性瘦素(leptin)基因小于扰RNA(small interfering RNA,siRNA)功能的表达质粒,研行究靶向leptin基因的siRNA对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)中leptin表达及HSC生物学特性的影响.方法以leptin为目的基因,以产生siRNA质粒载体psiRNA-hH1neo为表达模板,细胞内转录合成4对特异的siRNA和1对对照siRNA.构建能在真核细胞中表达的重组质粒leptin siRNA,用酶切方法和测序法对重组体进行鉴定.应用脂质体介导重组质粒转染HSC.RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测HSC的leptin表达情况,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞凋亡.结果酶切和序列测定表明,成功构建了leptin siRNA表达质粒;外源重组质粒siRNA3和siRNA4能够抑制leptin mRNA和蛋白表达(均P＜0.01);HSC增殖活性显著降低(P＜0.05),凋亡增加(P＜0.01).与未转染组相比,consiRNA、siRNA1和siRNA2转染组没有显著改变(均P＞0.05).结论构建的leptin siRNA表达载体可减少leptin的表达,抑制HSC增殖并诱导其凋亡.为肝纤维化基因治疗提供了新的靶点.
目的構建具有特異性瘦素(leptin)基因小于擾RNA(small interfering RNA,siRNA)功能的錶達質粒,研行究靶嚮leptin基因的siRNA對大鼠肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSC)中leptin錶達及HSC生物學特性的影響.方法以leptin為目的基因,以產生siRNA質粒載體psiRNA-hH1neo為錶達模闆,細胞內轉錄閤成4對特異的siRNA和1對對照siRNA.構建能在真覈細胞中錶達的重組質粒leptin siRNA,用酶切方法和測序法對重組體進行鑒定.應用脂質體介導重組質粒轉染HSC.RT-PCR、Western blot和免疫細胞化學法檢測HSC的leptin錶達情況,用MTT法檢測細胞增殖,用流式細胞儀分析細胞凋亡.結果酶切和序列測定錶明,成功構建瞭leptin siRNA錶達質粒;外源重組質粒siRNA3和siRNA4能夠抑製leptin mRNA和蛋白錶達(均P＜0.01);HSC增殖活性顯著降低(P＜0.05),凋亡增加(P＜0.01).與未轉染組相比,consiRNA、siRNA1和siRNA2轉染組沒有顯著改變(均P＞0.05).結論構建的leptin siRNA錶達載體可減少leptin的錶達,抑製HSC增殖併誘導其凋亡.為肝纖維化基因治療提供瞭新的靶點.
목적구건구유특이성수소(leptin)기인소우우RNA(small interfering RNA,siRNA)공능적표체질립,연행구파향leptin기인적siRNA대대서간성상세포(hepatic stellate cell,HSC)중leptin표체급HSC생물학특성적영향.방법이leptin위목적기인,이산생siRNA질립재체psiRNA-hH1neo위표체모판,세포내전록합성4대특이적siRNA화1대대조siRNA.구건능재진핵세포중표체적중조질립leptin siRNA,용매절방법화측서법대중조체진행감정.응용지질체개도중조질립전염HSC.RT-PCR、Western blot화면역세포화학법검측HSC적leptin표체정황,용MTT법검측세포증식,용류식세포의분석세포조망.결과매절화서렬측정표명,성공구건료leptin siRNA표체질립;외원중조질립siRNA3화siRNA4능구억제leptin mRNA화단백표체(균P＜0.01);HSC증식활성현저강저(P＜0.05),조망증가(P＜0.01).여미전염조상비,consiRNA、siRNA1화siRNA2전염조몰유현저개변(균P＞0.05).결론구건적leptin siRNA표체재체가감소leptin적표체,억제HSC증식병유도기조망.위간섬유화기인치료제공료신적파점.
