生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
555-560
,共6页
蒋文明%姜平%李玉峰%汤景元%王先炜%杜以军
蔣文明%薑平%李玉峰%湯景元%王先煒%杜以軍
장문명%강평%리옥봉%탕경원%왕선위%두이군
PRRSV%M%GP5%重组腺病毒%体液免疫%细胞免疫
PRRSV%M%GP5%重組腺病毒%體液免疫%細胞免疫
PRRSV%M%GP5%중조선병독%체액면역%세포면역
利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确.Pme Ⅰ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA.重组腺病毒DNA经Pac Ⅰ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白.将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应).证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础.
利用PCR擴增齣豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒的M基因,按正確的讀碼框與GP5基因串聯,成功構建穿梭載體pShuttle-CMV-M-GP5,經PCR、測序鑒定正確.Pme Ⅰ線性化後在BJ5183大腸桿菌內與腺病毒骨架載體pAdEasy-1同源重組,產生重組腺病毒DNA.重組腺病毒DNA經Pac Ⅰ線性化後用脂質體轉染HEK-293A細胞,在細胞內包裝成完整的腺病毒,通過IFA可以檢測到M與GP5串聯的重組腺病毒構建成功,可以正確地錶達目的蛋白.將構建好的重組腺病毒免疫小鼠,結果錶明可以誘導產生較彊的體液免疫應答(ELISA抗體和中和抗體)和細胞免疫應答(淋巴細胞增殖和CTL反應).證明該重組腺病毒具有較好的免疫原性,為下一步豬體免疫試驗奠定瞭基礎.
이용PCR확증출저번식여호흡종합정병독적M기인,안정학적독마광여GP5기인천련,성공구건천사재체pShuttle-CMV-M-GP5,경PCR、측서감정정학.Pme Ⅰ선성화후재BJ5183대장간균내여선병독골가재체pAdEasy-1동원중조,산생중조선병독DNA.중조선병독DNA경Pac Ⅰ선성화후용지질체전염HEK-293A세포,재세포내포장성완정적선병독,통과IFA가이검측도M여GP5천련적중조선병독구건성공,가이정학지표체목적단백.장구건호적중조선병독면역소서,결과표명가이유도산생교강적체액면역응답(ELISA항체화중화항체)화세포면역응답(림파세포증식화CTL반응).증명해중조선병독구유교호적면역원성,위하일보저체면역시험전정료기출.
