异种化人肾细胞癌特异性抗原G250真核表达载体的构建及表达
이충화인신세포암특이성항원G250진핵표체재체적구건급표체
Construction and Expression of Eukaryotic Expression Vector Encoding Xenogeneic G250 Complex Antigen for Renal Cell Carcinoma
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2009年 2期 151-154 ,共4页

    田仁礼%高江平%阎谨琦%贾锐%张亮%刘宁%王浩%韩刚%董金凯%李韧%于继云

    전인례%고강평%염근기%가예%장량%류저%왕호%한강%동금개%리인%우계운

    肾细胞癌%基因疫苗%真核表达%G250 腎細胞癌%基因疫苗%真覈錶達%G250
    신세포암%기인역묘%진핵표체%G250
    目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250(CAⅨ)主要T细胞表位区域、猴和鼠CAⅨ部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达.方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igk链前导信号肽(sig)、人IgG_Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中,继而又将酶切后的sig-tG250-Fc-GPI融合基因导入含有细小病毒内部核糖体结合位点(IRES)基因且可以共表达人GM-CSF和B7.1融合基因的真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;将构建的重组质粒pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7转染COS7细胞,利用流式细胞仪和免疫荧光检测其表达.结果:测序结果表明tG250融合基因序列正确,PCR和酶切鉴定证明已将其连入真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组质粒pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7在COS7细胞中得到很好的表达.结论:构建了重组质粒pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7,且在COS7细胞中有效表达,为以G250为靶点的抗肾细胞癌基因疫苗的构建与功能研究奠定了基础.
    목적:구건함유인신세포암특이성항원G250(CAⅨ)주요T세포표위구역、후화서CAⅨ부분편단구역융합기인tG250적진핵표체질립,병재후신COS7세포중표체.방법:통과기인합성화PCR기술구건인、후화서G250구역융합기인tG250,장기삽입함유인Igk련전도신호태(sig)、인IgG_Fc화당기린지선기순(GPI)묘정신호태융합기인서렬적세포막묘정수식진핵표체재체pCI-Fc-GPI중,계이우장매절후적sig-tG250-Fc-GPI융합기인도입함유세소병독내부핵당체결합위점(IRES)기인차가이공표체인GM-CSF화B7.1융합기인적진핵표체재체pVAX1-IRES-GM/B7중;장구건적중조질립pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7전염COS7세포,이용류식세포의화면역형광검측기표체.결과:측서결과표명tG250융합기인서렬정학,PCR화매절감정증명이장기련입진핵표체재체pVAX1-IRES-GM/B7중;류식세포의화면역형광적검측결과현시,중조질립pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7재COS7세포중득도흔호적표체.결론:구건료중조질립pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7,차재COS7세포중유효표체,위이G250위파점적항신세포암기인역묘적구건여공능연구전정료기출.
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