农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
856-863
,共8页
刘月光%史新娥%沈清武%袁媛%杨秋梅%高晓娟%陈宗正%杨公社
劉月光%史新娥%瀋清武%袁媛%楊鞦梅%高曉娟%陳宗正%楊公社
류월광%사신아%침청무%원원%양추매%고효연%진종정%양공사
骨骼肌纤维%卫星细胞%Pax7%猪
骨骼肌纖維%衛星細胞%Pax7%豬
골격기섬유%위성세포%Pax7%저
建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性.通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达.结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90％以上.成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性.MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达.该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料.
建立單根肌纖維法體外培養豬骨骼肌衛星細胞的體繫,瞭解其增殖和成肌特性.通過Ⅰ型膠原酶消化,從豬骨骼肌中分離完整的單根肌纖維併培養,用細胞免疫熒光鑒定肌纖維上的衛星細胞,隨後對從單根肌纖維上遊離齣來的衛星細胞進行細胞免疫熒光染色,傳代培養,成肌誘導分化和Western blot分析骨骼肌衛星細胞成肌特異性蛋白的錶達.結果顯示:分離併培養的單根肌纖維上附著有卵圓形的細胞,併隨時間的推移,細胞緩慢嚮外遷移併增殖,衛星細胞特異性標誌基因對盒轉錄因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫熒光染色呈暘性,且暘性率達到90％以上.成肌誘導分化後,細胞開始彙閤,併呈方嚮性生長,最終形成多覈肌管,且成肌特異性標誌基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)錶達呈暘性.MyoD蛋白高錶達于增殖期,而Myogenin和MyHC在進入分化期纔錶達.該實驗成功建立瞭豬骨骼肌單根肌纖維的體外培養方法併穫得瞭高純度的衛星細胞,為骨骼肌衛星細胞進行活體移植治療相關疾病研究提供瞭實驗材料.
건립단근기섬유법체외배양저골격기위성세포적체계,료해기증식화성기특성.통과Ⅰ형효원매소화,종저골격기중분리완정적단근기섬유병배양,용세포면역형광감정기섬유상적위성세포,수후대종단근기섬유상유리출래적위성세포진행세포면역형광염색,전대배양,성기유도분화화Western blot분석골격기위성세포성기특이성단백적표체.결과현시:분리병배양적단근기섬유상부착유란원형적세포,병수시간적추이,세포완만향외천이병증식,위성세포특이성표지기인대합전록인자(Paired protein box,Pax7)화성기분화항원(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)면역형광염색정양성,차양성솔체도90％이상.성기유도분화후,세포개시회합,병정방향성생장,최종형성다핵기관,차성기특이성표지기인Myogenin화myosin heavy chain(MyHC)표체정양성.MyoD단백고표체우증식기,이Myogenin화MyHC재진입분화기재표체.해실험성공건립료저골격기단근기섬유적체외배양방법병획득료고순도적위성세포,위골격기위성세포진행활체이식치료상관질병연구제공료실험재료.
