CAJ | 학술논문

目的:表达并纯化mLST8蛋白.方法:PCR扩增mLST8的编码cDNA,克隆到pET-28a(+)表达载体,将重组质粒pET-28a-mLST8转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达目的蛋白；提取包涵体,用Ni2+亲和层析纯化目的蛋白,稀释和透析相结合进行复性,对复性蛋白进行阴离子交换层析、分子筛层析,将纯的复性mLST8进行肽指纹质谱鉴定和圆二色谱分析.结果:酶切和DNA测序证明pET-28a-mLST8表达质粒构建无误,并在大肠杆菌中得到高效表达；通过Ni2+亲和层析、复性、离子交换层析和分子筛层析获得了较高纯度的复性蛋白,肽指纹质谱鉴定为mLST8;mLST8蛋白的二级结构[α螺旋为18.2％,β折叠为52.3％(其中平行结构为12.1％,反向平行结构为40.2％),β转角为20.7％,无规则卷曲为39.9％]表明其为典型的β折叠结构.结论:在大肠杆菌中表达了重组mLST8蛋白,复性获得了二级结构准确的mLST8,为进一步研究mLST8的晶体结构与功能奠定了基础.
목적:표체병순화mLST8단백.방법:PCR확증mLST8적편마cDNA,극륭도pET-28a(+)표체재체,장중조질립pET-28a-mLST8전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,재IPTG유도하표체목적단백；제취포함체,용Ni2+친화층석순화목적단백,희석화투석상결합진행복성,대복성단백진행음리자교환층석、분자사층석,장순적복성mLST8진행태지문질보감정화원이색보분석.결과:매절화DNA측서증명pET-28a-mLST8표체질립구건무오,병재대장간균중득도고효표체；통과Ni2+친화층석、복성、리자교환층석화분자사층석획득료교고순도적복성단백,태지문질보감정위mLST8;mLST8단백적이급결구[α라선위18.2％,β절첩위52.3％(기중평행결구위12.1％,반향평행결구위40.2％),β전각위20.7％,무규칙권곡위39.9％]표명기위전형적β절첩결구.결론:재대장간균중표체료중조mLST8단백,복성획득료이급결구준학적mLST8,위진일보연구mLST8적정체결구여공능전정료기출.