天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2002年
2期
94-97
,共4页
宋诗铎%郑东钧%祁伟%隋志芳%李为%方晖%何屏%魏殿军
宋詩鐸%鄭東鈞%祁偉%隋誌芳%李為%方暉%何屏%魏殿軍
송시탁%정동균%기위%수지방%리위%방휘%하병%위전군
逆转录病毒科%生长激素%成纤维细胞%动物%牛%人类学%肺%胚胎学%细胞学
逆轉錄病毒科%生長激素%成纖維細胞%動物%牛%人類學%肺%胚胎學%細胞學
역전록병독과%생장격소%성섬유세포%동물%우%인류학%폐%배태학%세포학
目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达.方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLC-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒.应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3bGH和2BS/bGH.结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现.RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达.结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高.
目的:以牛生長激素(bGH)為模型,建立逆轉錄病毒載體轉移繫統,體外轉染鼠成纖維細胞株NIH3T3和人胚肺成纖維細胞2BS,以穫得bGH錶達.方法:將PCR擴增的bGH基因片段插入逆轉錄病毒載體pSXLC-MDR相應酶切位點,穫得的重組逆轉錄病毒質粒.應用脂質體方法轉染重組質粒進入包裝細胞PA317,篩選長春新堿抗性剋隆株,收集上清液感染NIH3T3細胞和人胚肺成纖維細胞2BS,篩選攜帶bGH基因的成纖維細胞的剋隆株3T3bGH和2BS/bGH.結果:RT-PCR分析錶明基因轉染組的3T3/bGH細胞和2BS/bGH細胞在相噹于680bp處有一清晰的條帶,而空質粒對照組無相應條帶齣現.RIA分析錶明轉染基因細胞的培養液及胞漿蛋白有bGH蛋白錶達,而作為對照的3T3/mdr細胞和NIH/3T3細胞均無此蛋白錶達.結論:應用逆轉錄病毒IRBS載體繫統轉染bGH基因進入成纖維細胞,該繫統易篩選,轉染效率較高.
목적:이우생장격소(bGH)위모형,건립역전록병독재체전이계통,체외전염서성섬유세포주NIH3T3화인배폐성섬유세포2BS,이획득bGH표체.방법:장PCR확증적bGH기인편단삽입역전록병독재체pSXLC-MDR상응매절위점,획득적중조역전록병독질립.응용지질체방법전염중조질립진입포장세포PA317,사선장춘신감항성극륭주,수집상청액감염NIH3T3세포화인배폐성섬유세포2BS,사선휴대bGH기인적성섬유세포적극륭주3T3bGH화2BS/bGH.결과:RT-PCR분석표명기인전염조적3T3/bGH세포화2BS/bGH세포재상당우680bp처유일청석적조대,이공질립대조조무상응조대출현.RIA분석표명전염기인세포적배양액급포장단백유bGH단백표체,이작위대조적3T3/mdr세포화NIH/3T3세포균무차단백표체.결론:응용역전록병독IRBS재체계통전염bGH기인진입성섬유세포,해계통역사선,전염효솔교고.
