寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2004年
3期
135-138
,共4页
刚地弓形虫%ROP 2%基因克隆%融合表达
剛地弓形蟲%ROP 2%基因剋隆%融閤錶達
강지궁형충%ROP 2%기인극륭%융합표체
目的:构建弓形虫棒状体蛋白(ROP2)基因重组质粒并在大肠杆菌中表达,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子.方法:根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段,再克隆到pGEX-4T-1质粒,重组质粒经酶切及PCR鉴定,而后进行测序;重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中进行ITPG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western Blot分析.结果:ROP2基因PCR产物大小与预期相符,约1 043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,测序结果与已知序列基本吻合;SDS-PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为55kDa,表达产物约占菌体总蛋白17%,具有一定的免疫反应性.结论:克隆并表达了弓形虫ROP2基因,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究奠定了基础.
目的:構建弓形蟲棒狀體蛋白(ROP2)基因重組質粒併在大腸桿菌中錶達,用于篩選弓形蟲新的診斷抗原和疫苗分子.方法:根據ROP2基因已知序列,設計閤成一對引物,用PCR方法從弓形蟲RH株基因組DNA中擴增齣ROP2基因片段,再剋隆到pGEX-4T-1質粒,重組質粒經酶切及PCR鑒定,而後進行測序;重組質粒在大腸桿菌BL21(DE3)中進行ITPG誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE及Western Blot分析.結果:ROP2基因PCR產物大小與預期相符,約1 043bp,重組質粒經酶切及PCR鑒定錶明穫得正確重組子,測序結果與已知序列基本吻閤;SDS-PAGE及免疫印跡顯示ROP2融閤蛋白錶觀分子量約為55kDa,錶達產物約佔菌體總蛋白17%,具有一定的免疫反應性.結論:剋隆併錶達瞭弓形蟲ROP2基因,為下一步弓形蟲診斷及疫苗研究奠定瞭基礎.
목적:구건궁형충봉상체단백(ROP2)기인중조질립병재대장간균중표체,용우사선궁형충신적진단항원화역묘분자.방법:근거ROP2기인이지서렬,설계합성일대인물,용PCR방법종궁형충RH주기인조DNA중확증출ROP2기인편단,재극륭도pGEX-4T-1질립,중조질립경매절급PCR감정,이후진행측서;중조질립재대장간균BL21(DE3)중진행ITPG유도표체,표체산물경SDS-PAGE급Western Blot분석.결과:ROP2기인PCR산물대소여예기상부,약1 043bp,중조질립경매절급PCR감정표명획득정학중조자,측서결과여이지서렬기본문합;SDS-PAGE급면역인적현시ROP2융합단백표관분자량약위55kDa,표체산물약점균체총단백17%,구유일정적면역반응성.결론:극륭병표체료궁형충ROP2기인,위하일보궁형충진단급역묘연구전정료기출.
