HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化及抗原性分析
HIV-1핵심항원p24기인적표체、순화급항원성분석
Expression, purification and analysis of HIV-1 core p24 antigenicity
  • 万方数据
    华南预防医学 화남예방의학
    SOUTH CHINA JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
    2006年 4期 6-8 ,共3页

    周惠琼%江立敏%郑夔%颜瑾%曾常红%李晖%顾耀亮%梁文燕%柯昌文

    주혜경%강립민%정기%안근%증상홍%리휘%고요량%량문연%가창문

    HIV 核心蛋白质p24%基因表达%聚合酶链反应%电泳%免疫印迹法 HIV 覈心蛋白質p24%基因錶達%聚閤酶鏈反應%電泳%免疫印跡法
    HIV 핵심단백질p24%기인표체%취합매련반응%전영%면역인적법
    目的 在原核系统中表达全长HIV-1p24抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原.运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用Western Blot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测.结果 PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带.WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应.ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30).结论 构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础.
    목적 재원핵계통중표체전장HIV-1p24항원,병대기항원성진행감정.방법 이용PCR기술종HIV-1전기인질립(BH-10)중확증p24항원기인,통과매절소화후련접도표체재체pET22b상,용차련접산물전화대장애희균BL21(DE3),경IPTG유도,표체p24항원.운용쌍매절기술、SDS-PAGE전영검측삽입기인편단적정학성,병용Western Blot(WB)급ELISA법대표체산물적항원성진행검측.결과 PCR산물화구건적중조질립pET22b-p24경쌍매절삽입적외원기인편단균위690 bp,여예기p24항원전기인편단대소일치.순화단백SDS-PAGE전영,가견1조상대분자량약26×103적외원표체단백대,여예기대소일치,미견잡단백대.WB결과현시중조단백여HIV-1양성혈청정특이성반응,여건강인혈청몰유반응.ELISA검측p24항원령민도위93.94%(62/66),특이성위93.33%(28/30).결론 구건료HIV-1 p24표체재체pET22b-p24,병재원핵세포중고효표체,기표체산물구유량호적항원성,위연제HIV항체학인시제전정료량호적기출.
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