CAJ | 학술논문

目的:壳聚糖作为基因转移的载体存在着转染效率的问题.实验对壳聚糖介导的报告基因增强型绿色荧光蛋白在关节软骨细胞中的基因表达效率进行定量分析.方法:实验于2005-09/2006-06在健康科学研究所骨科细胞与分子生物学实验室完成.①实验材料:壳聚糖购自Sigma公司;荧光质粒pEGFP-C3为Clontech公司产品;成年新西兰白兔2只.②实验分组:实验分为空白对照组(软骨细胞不转染)、裸质粒pEGFP-C3对照组和壳聚糖-pEGFP转染组.③实验过程:软骨细胞取自新西兰白兔的关节软骨.以多聚糖壳聚糖为载体,荧光质粒pEGFP-C3作为报告基因,利用高速震荡法制备壳聚糖-pEGFP超微颗粒,用制备的携带不同量(1,2,3,4,5 μg)DNA的壳聚糖-pEGFP超微颗粒对软骨细胞进行体外转染.裸质粒pEGFP-C3对照组加入等量的DNA.④实验评估:光镜观察软骨细胞及壳聚糖-DNA超微颗粒的形态;荧光显微镜观察不同条件下绿色荧光蛋白的表达并进行定量分析.结果:①光镜下观察空白对照组,裸质粒pEGFP-C3对照组及壳聚糖-pEGFP转染组,软骨细胞形态均呈多角形,贴壁生长,增长活跃,转染组软骨细胞周围黏附有大量的球形小颗粒;制备的壳聚糖-DNA超微颗粒大小均匀,直径大约在150～300 nm.②在壳聚糖-pEGFP超微颗粒转染的软骨细胞中观察到有绿色荧光蛋白的表达,且DNA含量在1～5 μg范围内,细胞的转染效率和表达效率随颗粒包被的DNA量的增加而增加.结论:壳聚糖在关节基因转移中具有一定的体外DNA导入的功能,且随壳聚糖-pEGFP超微颗粒所携带的DNA量的增加转染效率和表达效率增加,经进一步研究它有望成为一种关节体内基因导入的有效工具.
목적:각취당작위기인전이적재체존재착전염효솔적문제.실험대각취당개도적보고기인증강형록색형광단백재관절연골세포중적기인표체효솔진행정량분석.방법:실험우2005-09/2006-06재건강과학연구소골과세포여분자생물학실험실완성.①실험재료:각취당구자Sigma공사;형광질립pEGFP-C3위Clontech공사산품;성년신서란백토2지.②실험분조:실험분위공백대조조(연골세포불전염)、라질립pEGFP-C3대조조화각취당-pEGFP전염조.③실험과정:연골세포취자신서란백토적관절연골.이다취당각취당위재체,형광질립pEGFP-C3작위보고기인,이용고속진탕법제비각취당-pEGFP초미과립,용제비적휴대불동량(1,2,3,4,5 μg)DNA적각취당-pEGFP초미과립대연골세포진행체외전염.라질립pEGFP-C3대조조가입등량적DNA.④실험평고:광경관찰연골세포급각취당-DNA초미과립적형태;형광현미경관찰불동조건하록색형광단백적표체병진행정량분석.결과:①광경하관찰공백대조조,라질립pEGFP-C3대조조급각취당-pEGFP전염조,연골세포형태균정다각형,첩벽생장,증장활약,전염조연골세포주위점부유대량적구형소과립;제비적각취당-DNA초미과립대소균균,직경대약재150～300 nm.②재각취당-pEGFP초미과립전염적연골세포중관찰도유록색형광단백적표체,차DNA함량재1～5 μg범위내,세포적전염효솔화표체효솔수과립포피적DNA량적증가이증가.결론:각취당재관절기인전이중구유일정적체외DNA도입적공능,차수각취당-pEGFP초미과립소휴대적DNA량적증가전염효솔화표체효솔증가,경진일보연구타유망성위일충관절체내기인도입적유효공구.