CAJ | 학술논문

对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析.根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA.结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列舍有1个内含子.Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的Big-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构.序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体--巴卡亭Ⅲ.有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础.
대중국중요약용식물남방홍두삼중적10-거을선파잡정Ⅲ-10-을선전이매(DBAT)기인진행분리、측서이급생물신식학분석.근거GenBank중이등록적10-거을선파잡정Ⅲ-10-을선전이매(DBAT)기인cDNA서렬설계인물,채용RT-PCR기술종남방홍두삼협편중극륭료1개DBAT기인Tc-DBAT적전장cDNA.결과현시,Tc-DBAT cDNA함유1개1 323 bp적개방열독광(open reading frame,ORF),편마440개안기산,대응기인조서렬사유1개내함자.Tc-DBAT단백N단함유5개N-선기화작용위점화2개보수적N-당기화작용위점,구유1개보수적Big-1결구역,다개중요적린산화위점이급1개유사개결합단백중복결구.서렬동원성비교、계통발생분석이급단백질고급결구예측균표명,Tc-DBAT속우전이매초가족(transferase superfamily),시일개구유을선전이매활성적공능단백,능구최화10-거을선파잡정Ⅲ(10-DAB)10위적을선화,종이생성항암신약자삼순생물합성도경중적최후일개쌍첩중간체--파잡정Ⅲ.유망통과성공극륭화감정자삼순생물합성도경중적관건매기인체도제고기반합성전체파잡정Ⅲ산량적목적,병차위진일보이용조합표체계통상업화생산자삼순전정기출.