畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
5期
711-716
,共6页
张健%陈艳%乔传玲%杨焕良%唐续%辛晓光%陈化兰
張健%陳豔%喬傳玲%楊煥良%唐續%辛曉光%陳化蘭
장건%진염%교전령%양환량%당속%신효광%진화란
甲型H1N1猪流感病毒%HA%MAb
甲型H1N1豬流感病毒%HA%MAb
갑형H1N1저류감병독%HA%MAb
本研究旨在制备猪甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体.采用RT-PCR方法扩增猪甲型H1N1流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS上,获得重组质粒pCAGGS-HA,转染293T细胞,通过间接免疫荧光(IFA)检测表明HA蛋白在293T细胞中得到表达.将pCAGGS-HA以100 μg·只-1剂量免疫5周龄BALB/c小鼠,获得4株稳定分泌抗HA蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为11G7、3C10、3G3和2B11.其中11G7诱导小鼠产生的腹水HI效价为14log2,中和效价为1:8 192,HI试验结果进一步表明11G7只与甲型H1N1流感病毒发生反应,而不与其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亚型流感病毒反应.该MAb的制备将为建立猪甲型H1N1流感病毒与传统亚型SIV的鉴别诊断方法奠定基础.
本研究旨在製備豬甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)蛋白的特異性單剋隆抗體.採用RT-PCR方法擴增豬甲型H1N1流感病毒的HA基因,將其剋隆至真覈錶達載體pCAGGS上,穫得重組質粒pCAGGS-HA,轉染293T細胞,通過間接免疫熒光(IFA)檢測錶明HA蛋白在293T細胞中得到錶達.將pCAGGS-HA以100 μg·隻-1劑量免疫5週齡BALB/c小鼠,穫得4株穩定分泌抗HA蛋白單剋隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞株,分彆命名為11G7、3C10、3G3和2B11.其中11G7誘導小鼠產生的腹水HI效價為14log2,中和效價為1:8 192,HI試驗結果進一步錶明11G7隻與甲型H1N1流感病毒髮生反應,而不與其他H1N1、H1N2、H3N2、H5N1及H9N2亞型流感病毒反應.該MAb的製備將為建立豬甲型H1N1流感病毒與傳統亞型SIV的鑒彆診斷方法奠定基礎.
본연구지재제비저갑형H1N1류감병독혈응소(HA)단백적특이성단극륭항체.채용RT-PCR방법확증저갑형H1N1류감병독적HA기인,장기극륭지진핵표체재체pCAGGS상,획득중조질립pCAGGS-HA,전염293T세포,통과간접면역형광(IFA)검측표명HA단백재293T세포중득도표체.장pCAGGS-HA이100 μg·지-1제량면역5주령BALB/c소서,획득4주은정분비항HA단백단극륭항체(MAb)적잡교류세포주,분별명명위11G7、3C10、3G3화2B11.기중11G7유도소서산생적복수HI효개위14log2,중화효개위1:8 192,HI시험결과진일보표명11G7지여갑형H1N1류감병독발생반응,이불여기타H1N1、H1N2、H3N2、H5N1급H9N2아형류감병독반응.해MAb적제비장위건립저갑형H1N1류감병독여전통아형SIV적감별진단방법전정기출.
