CAJ | 학술논문

针对人体血管内皮生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)受体型酪氨酸激酶(Receptor tyrosine kinase,RTK)进行体外表达,并对表达和纯化条件进行优化.构建表达VEGFR-2酪氨酸激酶重组大肠杆菌,通过研究不同诱导温度、IPTG浓度、诱导时间和超声条件等对蛋白表达的影响,采用Ni-NTA亲和层析法、Western Blot法ELISA方法对重组蛋白进行纯化、鉴定和活性测定.成功地将1 000 bp左右的VEGFR-2酪氨酸激酶DNA片段插入栽体pQE30中,在优化条件下重组蛋白较好地可溶性表达.SDS-PAGE表明重组蛋白相对分子质量约为36 000,与预期一致,Western Blot分析表明它能与抗Flk-1和抗His抗体特异反应,ELISA检测结果表明重组蛋白具有利用ATP催化底物磷酸化的激酶活性.通过重组DNA技术使人体VEGFR-2酪氨酸激酶在大肠杆菌得到可溶性表达,纯化重组蛋白具有较高的活性.
침대인체혈관내피생장인자수체2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)수체형락안산격매(Receptor tyrosine kinase,RTK)진행체외표체,병대표체화순화조건진행우화.구건표체VEGFR-2락안산격매중조대장간균,통과연구불동유도온도、IPTG농도、유도시간화초성조건등대단백표체적영향,채용Ni-NTA친화층석법、Western Blot법ELISA방법대중조단백진행순화、감정화활성측정.성공지장1 000 bp좌우적VEGFR-2락안산격매DNA편단삽입재체pQE30중,재우화조건하중조단백교호지가용성표체.SDS-PAGE표명중조단백상대분자질량약위36 000,여예기일치,Western Blot분석표명타능여항Flk-1화항His항체특이반응,ELISA검측결과표명중조단백구유이용ATP최화저물린산화적격매활성.통과중조DNA기술사인체VEGFR-2락안산격매재대장간균득도가용성표체,순화중조단백구유교고적활성.