中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
1999年
6期
431-438
,共8页
尹斌%陈雨亭%朱敏%罗一菁%朱宁%徐世才%吴冠芸%沈岩
尹斌%陳雨亭%硃敏%囉一菁%硃寧%徐世纔%吳冠蕓%瀋巖
윤빈%진우정%주민%라일정%주저%서세재%오관예%침암
DNA C5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶 cDNA克隆 选择剪接
DNA C5胞嘧啶特異的重新甲基轉移酶 cDNA剋隆 選擇剪接
DNA C5포밀정특이적중신갑기전이매 cDNA극륭 선택전접
目的克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA.方法从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9 d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapid amplification of cDNA ends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测.根据整合后的cDNA两端序列设计引物进行RT-PCR,克隆PCR产物,并对产物进行全序列测定,验证整合序列的客观性.结果(1)克隆的序列为小鼠DNA C5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶(denovo DNA cytosine 5'-specific methyltransferase,Dnmt)基因cDNA,发现该基因比已报道的Dnmt3b cDNA序列在5'方向延伸了152 bp,其起始密码子上游存在一个新的选择剪接区域.(3)从小鼠胚胎组织中克隆出8种Dnmt3b cDNA选择剪接异构体,并均已获得Genbank序列接收号.结论获得了Dnmt3b cDNA的4kb全长序列,发现Dnmt3b基因上游存在新的5'选择剪接序列,可能通过选择剪接形成上游终止密码子的切换;Dnmt3b在小鼠胚胎发育过程中存在着复杂的选择剪接表达.
目的剋隆與小鼠胚胎髮育相關的新的全長cDNA.方法從小鼠胚胎cDNA文庫中篩選齣一箇新的EST,以8～9 d齡小鼠胚胎組織mRNA為模闆進行RACE(rapid amplification of cDNA ends),結閤PCR篩選cDNA文庫,穫得其全長cDNA序列後進行序列同源檢索、結構分析和功能預測.根據整閤後的cDNA兩耑序列設計引物進行RT-PCR,剋隆PCR產物,併對產物進行全序列測定,驗證整閤序列的客觀性.結果(1)剋隆的序列為小鼠DNA C5胞嘧啶特異的重新甲基轉移酶(denovo DNA cytosine 5'-specific methyltransferase,Dnmt)基因cDNA,髮現該基因比已報道的Dnmt3b cDNA序列在5'方嚮延伸瞭152 bp,其起始密碼子上遊存在一箇新的選擇剪接區域.(3)從小鼠胚胎組織中剋隆齣8種Dnmt3b cDNA選擇剪接異構體,併均已穫得Genbank序列接收號.結論穫得瞭Dnmt3b cDNA的4kb全長序列,髮現Dnmt3b基因上遊存在新的5'選擇剪接序列,可能通過選擇剪接形成上遊終止密碼子的切換;Dnmt3b在小鼠胚胎髮育過程中存在著複雜的選擇剪接錶達.
목적극륭여소서배태발육상관적신적전장cDNA.방법종소서배태cDNA문고중사선출일개신적EST,이8～9 d령소서배태조직mRNA위모판진행RACE(rapid amplification of cDNA ends),결합PCR사선cDNA문고,획득기전장cDNA서렬후진행서렬동원검색、결구분석화공능예측.근거정합후적cDNA량단서렬설계인물진행RT-PCR,극륭PCR산물,병대산물진행전서렬측정,험증정합서렬적객관성.결과(1)극륭적서렬위소서DNA C5포밀정특이적중신갑기전이매(denovo DNA cytosine 5'-specific methyltransferase,Dnmt)기인cDNA,발현해기인비이보도적Dnmt3b cDNA서렬재5'방향연신료152 bp,기기시밀마자상유존재일개신적선택전접구역.(3)종소서배태조직중극륭출8충Dnmt3b cDNA선택전접이구체,병균이획득Genbank서렬접수호.결론획득료Dnmt3b cDNA적4kb전장서렬,발현Dnmt3b기인상유존재신적5'선택전접서렬,가능통과선택전접형성상유종지밀마자적절환;Dnmt3b재소서배태발육과정중존재착복잡적선택전접표체.
