中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
6期
719-724
,共6页
夏永娟%黄宝成%温伟红%黄威权
夏永娟%黃寶成%溫偉紅%黃威權
하영연%황보성%온위홍%황위권
鳗弧菌%二硫键稳定型抗体%定点突变%基因克隆%噬菌体呈现
鰻弧菌%二硫鍵穩定型抗體%定點突變%基因剋隆%噬菌體呈現
만호균%이류건은정형항체%정점돌변%기인극륭%서균체정현
抗鳗弧菌独特型单克隆抗体1E10是能够模拟鳗弧菌的保护性表位,可以作为疫苗使用的一种单克隆抗体.利用基因工程抗体技术从抗鳗弧菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株1E10中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因(vH和VL).通过定点突变技术将VH44和VL105突变为半胱氨酸并且连接到噬菌体表达载体pCANTAB5E中,突变后的VH和VL基因位于cpⅢ先导序列和cpⅢ基因之间,在LacZ启动子调控之下,以融合蛋白的形式被导入细胞间隙,依靠链间二硫键组装成二硫键稳定型Fv抗体(dsFv).加入辅助噬菌体M13K07后,dsFv以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面.ELISA测定显示:dsFv噬菌体能够与抗原结合并且这种结合呈噬菌体浓度依赖.结果表明:成功构建出了抗鳗孤菌独特型单克隆抗体dsFv基因并使其在噬菌体表面获得了正确呈现.该dsFv噬菌体有望成为新一代基因工程疫苗用于预防鱼类鳗弧菌感染.
抗鰻弧菌獨特型單剋隆抗體1E10是能夠模擬鰻弧菌的保護性錶位,可以作為疫苗使用的一種單剋隆抗體.利用基因工程抗體技術從抗鰻弧菌獨特型單剋隆抗體雜交瘤細胞株1E10中剋隆齣抗體的重鏈及輕鏈可變區基因(vH和VL).通過定點突變技術將VH44和VL105突變為半胱氨痠併且連接到噬菌體錶達載體pCANTAB5E中,突變後的VH和VL基因位于cpⅢ先導序列和cpⅢ基因之間,在LacZ啟動子調控之下,以融閤蛋白的形式被導入細胞間隙,依靠鏈間二硫鍵組裝成二硫鍵穩定型Fv抗體(dsFv).加入輔助噬菌體M13K07後,dsFv以融閤蛋白的形式錶達在噬菌體錶麵.ELISA測定顯示:dsFv噬菌體能夠與抗原結閤併且這種結閤呈噬菌體濃度依賴.結果錶明:成功構建齣瞭抗鰻孤菌獨特型單剋隆抗體dsFv基因併使其在噬菌體錶麵穫得瞭正確呈現.該dsFv噬菌體有望成為新一代基因工程疫苗用于預防魚類鰻弧菌感染.
항만호균독특형단극륭항체1E10시능구모의만호균적보호성표위,가이작위역묘사용적일충단극륭항체.이용기인공정항체기술종항만호균독특형단극륭항체잡교류세포주1E10중극륭출항체적중련급경련가변구기인(vH화VL).통과정점돌변기술장VH44화VL105돌변위반광안산병차련접도서균체표체재체pCANTAB5E중,돌변후적VH화VL기인위우cpⅢ선도서렬화cpⅢ기인지간,재LacZ계동자조공지하,이융합단백적형식피도입세포간극,의고련간이류건조장성이류건은정형Fv항체(dsFv).가입보조서균체M13K07후,dsFv이융합단백적형식표체재서균체표면.ELISA측정현시:dsFv서균체능구여항원결합병차저충결합정서균체농도의뢰.결과표명:성공구건출료항만고균독특형단극륭항체dsFv기인병사기재서균체표면획득료정학정현.해dsFv서균체유망성위신일대기인공정역묘용우예방어류만호균감염.
