外科理论与实践
外科理論與實踐
외과이론여실천
JOURNAL OF SURGERY CONCEPTS & PRACTICE
2006年
1期
49-53
,共5页
叶展%李劲松%赵涵芳%陈诗书
葉展%李勁鬆%趙涵芳%陳詩書
협전%리경송%조함방%진시서
血管内皮生长因子,人%克隆细胞%基因疗法
血管內皮生長因子,人%剋隆細胞%基因療法
혈관내피생장인자,인%극륭세포%기인요법
目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,筛选出能够持续分泌人血管内皮细胞生长因子(hVEGF165)的细胞株,为难于愈合创面(如糖尿病性慢性溃疡)的治疗提供有效方法.方法:将含有hVEGF165的穿梭质粒pCDNA3-hVEGF165导入NIH3T3细胞,使用G-418根据有限稀释法筛选出7个单克隆细胞株.挑选出整合有hVEGF165基因且表达最高的一个细胞克隆在DNA、mRNA和蛋白质水平进行鉴定,同时使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、鸡胚实验检测表达产物的生物学活性.结果:PCR和Southern印迹证明hVEGF165基因已整合入NIH-3T3细胞基因组,RT-PCR和Northern印迹则表明该细胞株能够表达hVEGF165-mRNA.用hVEGF165-ELISA法证实在蛋白质水平该细胞株能够持续表达hVEGF1653个月以上,并始终保持非常高的水平.MTT实验显示其具备较强的促进内皮细胞增殖的功能,而鸡胚实验则表明该工程细胞有很强的促进胚胎血管生成的作用.结论:成功地制备了hVEGF165单克隆工程细胞,为创伤愈合的基因治疗提供实验准备.
目的:用基因工程方法改造成纖維細胞,篩選齣能夠持續分泌人血管內皮細胞生長因子(hVEGF165)的細胞株,為難于愈閤創麵(如糖尿病性慢性潰瘍)的治療提供有效方法.方法:將含有hVEGF165的穿梭質粒pCDNA3-hVEGF165導入NIH3T3細胞,使用G-418根據有限稀釋法篩選齣7箇單剋隆細胞株.挑選齣整閤有hVEGF165基因且錶達最高的一箇細胞剋隆在DNA、mRNA和蛋白質水平進行鑒定,同時使用四甲基偶氮唑藍比色法(MTT)、鷄胚實驗檢測錶達產物的生物學活性.結果:PCR和Southern印跡證明hVEGF165基因已整閤入NIH-3T3細胞基因組,RT-PCR和Northern印跡則錶明該細胞株能夠錶達hVEGF165-mRNA.用hVEGF165-ELISA法證實在蛋白質水平該細胞株能夠持續錶達hVEGF1653箇月以上,併始終保持非常高的水平.MTT實驗顯示其具備較彊的促進內皮細胞增殖的功能,而鷄胚實驗則錶明該工程細胞有很彊的促進胚胎血管生成的作用.結論:成功地製備瞭hVEGF165單剋隆工程細胞,為創傷愈閤的基因治療提供實驗準備.
목적:용기인공정방법개조성섬유세포,사선출능구지속분비인혈관내피세포생장인자(hVEGF165)적세포주,위난우유합창면(여당뇨병성만성궤양)적치료제공유효방법.방법:장함유hVEGF165적천사질립pCDNA3-hVEGF165도입NIH3T3세포,사용G-418근거유한희석법사선출7개단극륭세포주.도선출정합유hVEGF165기인차표체최고적일개세포극륭재DNA、mRNA화단백질수평진행감정,동시사용사갑기우담서람비색법(MTT)、계배실험검측표체산물적생물학활성.결과:PCR화Southern인적증명hVEGF165기인이정합입NIH-3T3세포기인조,RT-PCR화Northern인적칙표명해세포주능구표체hVEGF165-mRNA.용hVEGF165-ELISA법증실재단백질수평해세포주능구지속표체hVEGF1653개월이상,병시종보지비상고적수평.MTT실험현시기구비교강적촉진내피세포증식적공능,이계배실험칙표명해공정세포유흔강적촉진배태혈관생성적작용.결론:성공지제비료hVEGF165단극륭공정세포,위창상유합적기인치료제공실험준비.
