南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
7期
1009-1013
,共5页
阴继霞%武大林%许文娟%孙竞
陰繼霞%武大林%許文娟%孫競
음계하%무대림%허문연%손경
实时荧光定量PCR%T细胞受体删除DNA环(TREC)%造血干细胞移植
實時熒光定量PCR%T細胞受體刪除DNA環(TREC)%造血榦細胞移植
실시형광정량PCR%T세포수체산제DNA배(TREC)%조혈간세포이식
目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础.方法在ABI7000PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品,摸索最佳扩增条件及建立标准曲线,然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本.结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物.TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高.金牌热启动Taq酶,比较普通Taq酶而言,提高了PCR的特异性和敏感性.FQ-PCR的反应条件设定:95℃10min后95℃5s,53℃30s,40循环结束.结论通过摸索与优化实验条件,建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法.
目的建立及優化檢測移植後患者外週血TREC拷貝數的實時熒光定量PCR(FQ-PCR)的方法及實驗影響條件,為臨床研究造血榦細胞移植的免疫功能重建機製提供方法學基礎.方法在ABI7000PCR儀上實時擴增檢測構建的TREC質粒標準品,摸索最佳擴增條件及建立標準麯線,然後用優化的FQ-PCR方法檢測臨床樣本.結果T3、T4引物和R3、R4引物的擴增效率分彆優于T1、T2引物和R1、R2引物.TaqMan-MGB探針比普通的TaqMan探針擴增效率高.金牌熱啟動Taq酶,比較普通Taq酶而言,提高瞭PCR的特異性和敏感性.FQ-PCR的反應條件設定:95℃10min後95℃5s,53℃30s,40循環結束.結論通過摸索與優化實驗條件,建立瞭實時熒光定量PCR檢測外週血單箇覈細胞中TREC的方法.
목적건립급우화검측이식후환자외주혈TREC고패수적실시형광정량PCR(FQ-PCR)적방법급실험영향조건,위림상연구조혈간세포이식적면역공능중건궤제제공방법학기출.방법재ABI7000PCR의상실시확증검측구건적TREC질립표준품,모색최가확증조건급건립표준곡선,연후용우화적FQ-PCR방법검측림상양본.결과T3、T4인물화R3、R4인물적확증효솔분별우우T1、T2인물화R1、R2인물.TaqMan-MGB탐침비보통적TaqMan탐침확증효솔고.금패열계동Taq매,비교보통Taq매이언,제고료PCR적특이성화민감성.FQ-PCR적반응조건설정:95℃10min후95℃5s,53℃30s,40순배결속.결론통과모색여우화실험조건,건립료실시형광정량PCR검측외주혈단개핵세포중TREC적방법.
