医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2007年
1期
1-5
,共5页
刘金花%俞娟%许蓓妮%姚军%左泽华%赵旻%伍欣星
劉金花%俞娟%許蓓妮%姚軍%左澤華%趙旻%伍訢星
류금화%유연%허배니%요군%좌택화%조민%오흔성
人乳头瘤病毒%人乳头瘤病毒16型变异株E7%亚细胞定位%核定位信号%激光共聚焦
人乳頭瘤病毒%人乳頭瘤病毒16型變異株E7%亞細胞定位%覈定位信號%激光共聚焦
인유두류병독%인유두류병독16형변이주E7%아세포정위%핵정위신호%격광공취초
目的 构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础.方法 采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位.结果 重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内.结论 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关.
目的 構建增彊綠色熒光蛋白(EGFP)-人乳頭瘤病毒16型變異株E7(HPV16-HBE7)重組質粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亞細胞定位,為進一步瞭解其生物學功能奠定基礎.方法 採用分子剋隆技術,將HPV16-HBE7基因剋隆在pEGFP-C1錶達載體上,用脂質體法導入宮頸癌細胞中;West-ern印跡檢測HBE7蛋白的錶達;同時藉助免疫熒光技術和EGFP-融閤蛋白技術,採用激光共聚焦顯微鏡觀察HBE7蛋白的亞細胞定位.結果 重組質粒經PCR、酶切和測序鑒定,其目的片段大小、插入位點和覈苷痠序列完全正確;結果錶明,轉染細胞HBE7蛋白的相對錶達量其胞漿明顯多于胞覈;各箇時間段HBE7蛋白均以胞漿分佈為主,綠色熒光密集點狀分佈于細胞漿內,而野生株E7(WE7)蛋白分佈在覈內.結論 人乳頭瘤病毒16型變異株E7蛋白主要分佈在細胞漿內,以胞漿為主的分佈可能和HBE7基因髮生突變後丟失覈定位信號有關.
목적 구건증강록색형광단백(EGFP)-인유두류병독16형변이주E7(HPV16-HBE7)중조질립pEGFP-HBE7,연구HPV16-HBE7단백아세포정위,위진일보료해기생물학공능전정기출.방법 채용분자극륭기술,장HPV16-HBE7기인극륭재pEGFP-C1표체재체상,용지질체법도입궁경암세포중;West-ern인적검측HBE7단백적표체;동시차조면역형광기술화EGFP-융합단백기술,채용격광공취초현미경관찰HBE7단백적아세포정위.결과 중조질립경PCR、매절화측서감정,기목적편단대소、삽입위점화핵감산서렬완전정학;결과표명,전염세포HBE7단백적상대표체량기포장명현다우포핵;각개시간단HBE7단백균이포장분포위주,록색형광밀집점상분포우세포장내,이야생주E7(WE7)단백분포재핵내.결론 인유두류병독16형변이주E7단백주요분포재세포장내,이포장위주적분포가능화HBE7기인발생돌변후주실핵정위신호유관.
