福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
3期
193-197
,共5页
徐玫芳%臧盛兵%黄爱民%刘景丰%高凌云%高美钦
徐玫芳%臧盛兵%黃愛民%劉景豐%高凌雲%高美欽
서매방%장성병%황애민%류경봉%고릉운%고미흠
肿瘤抑制蛋白类%遗传载体%转染%肝肿瘤%肿瘤侵润%真核细胞核%质粒
腫瘤抑製蛋白類%遺傳載體%轉染%肝腫瘤%腫瘤侵潤%真覈細胞覈%質粒
종류억제단백류%유전재체%전염%간종류%종류침윤%진핵세포핵%질립
目的 构建KiSS-1基因重组真核质粒,将其导入人高转移肝癌MHCC97-H细胞中,获得瞬时表达的细胞株,为进一步研究KiSS-1基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响奠定基础.方法 Trizol试剂法提取新鲜胎盘组织总RNA,经RT-PCR扩增目的 片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌Ecoli.Dh5α扩增以获得重组载体,采用脂质体介导转染技术将高纯度的KiSS-1质粒转染到人高转移肝癌细胞株中,用RT-PCR和Western blot技术加以鉴定.结果 RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经PCR、双酶切鉴定及测序,证实已将KiSS-1基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot证实KiSS-1基因已转染入MHCC97-H细胞中.结论 成功获得pcDNA3.1/HisC/KiSS-1重组质粒和瞬时表达KiSS-1基因的肝癌细胞,为后续建立稳定转染的KiSS-1高表达阳性细胞克隆奠定基础,为体内外实验研究KiSS-1对人肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响提供前提条件.
目的 構建KiSS-1基因重組真覈質粒,將其導入人高轉移肝癌MHCC97-H細胞中,穫得瞬時錶達的細胞株,為進一步研究KiSS-1基因對人肝癌細胞侵襲轉移的影響奠定基礎.方法 Trizol試劑法提取新鮮胎盤組織總RNA,經RT-PCR擴增目的 片段,PCR產物及真覈錶達載體分彆雙酶切後進行連接,併轉化入大腸桿菌Ecoli.Dh5α擴增以穫得重組載體,採用脂質體介導轉染技術將高純度的KiSS-1質粒轉染到人高轉移肝癌細胞株中,用RT-PCR和Western blot技術加以鑒定.結果 RT-PCR穫得預期大小的特異性DNA片段,經PCR、雙酶切鑒定及測序,證實已將KiSS-1基因cDNA片段正確插入真覈錶達載體中;RT-PCR、免疫細胞化學和Western blot證實KiSS-1基因已轉染入MHCC97-H細胞中.結論 成功穫得pcDNA3.1/HisC/KiSS-1重組質粒和瞬時錶達KiSS-1基因的肝癌細胞,為後續建立穩定轉染的KiSS-1高錶達暘性細胞剋隆奠定基礎,為體內外實驗研究KiSS-1對人肝癌細胞增殖、侵襲和轉移能力的影響提供前提條件.
목적 구건KiSS-1기인중조진핵질립,장기도입인고전이간암MHCC97-H세포중,획득순시표체적세포주,위진일보연구KiSS-1기인대인간암세포침습전이적영향전정기출.방법 Trizol시제법제취신선태반조직총RNA,경RT-PCR확증목적 편단,PCR산물급진핵표체재체분별쌍매절후진행련접,병전화입대장간균Ecoli.Dh5α확증이획득중조재체,채용지질체개도전염기술장고순도적KiSS-1질립전염도인고전이간암세포주중,용RT-PCR화Western blot기술가이감정.결과 RT-PCR획득예기대소적특이성DNA편단,경PCR、쌍매절감정급측서,증실이장KiSS-1기인cDNA편단정학삽입진핵표체재체중;RT-PCR、면역세포화학화Western blot증실KiSS-1기인이전염입MHCC97-H세포중.결론 성공획득pcDNA3.1/HisC/KiSS-1중조질립화순시표체KiSS-1기인적간암세포,위후속건립은정전염적KiSS-1고표체양성세포극륭전정기출,위체내외실험연구KiSS-1대인간암세포증식、침습화전이능력적영향제공전제조건.
