甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
1期
5-9,13
,共6页
宋楠%吴培星%张继瑜%徐玲%孙茜胜%李纯玲%伏小平
宋楠%吳培星%張繼瑜%徐玲%孫茜勝%李純玲%伏小平
송남%오배성%장계유%서령%손천성%리순령%복소평
抗菌肽hepcidin%毕赤酵母%表达
抗菌肽hepcidin%畢赤酵母%錶達
항균태hepcidin%필적효모%표체
根据GenBank上马属抗菌肽hepcidin的氨基酸序列,设计并合成全长279 bp的hepcidin基因,将该基因插入pPICZαA中构建真核表达载体,PCR鉴定的阳性质粒电转化毕赤酵母菌X-33,用不同浓度Zeocin筛选高拷贝阳性重组菌,甲醇诱导表达,表达上清液经超滤膜纯化后,利用SDS-PAGE电泳和抑菌试验进行鉴定.结果表明:PCR检测和基因测序表明hepcidin基因合成正确,成功构建真核表达载体pPICZαA-hepcidin;SDS-PAGE电泳显示,诱导表达hepcidin蛋白分子质量约10 ku,超滤纯化后蛋白浓度达177.8 mg·L-1;抑菌结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、无乳链球菌均有较好的抗菌活性.
根據GenBank上馬屬抗菌肽hepcidin的氨基痠序列,設計併閤成全長279 bp的hepcidin基因,將該基因插入pPICZαA中構建真覈錶達載體,PCR鑒定的暘性質粒電轉化畢赤酵母菌X-33,用不同濃度Zeocin篩選高拷貝暘性重組菌,甲醇誘導錶達,錶達上清液經超濾膜純化後,利用SDS-PAGE電泳和抑菌試驗進行鑒定.結果錶明:PCR檢測和基因測序錶明hepcidin基因閤成正確,成功構建真覈錶達載體pPICZαA-hepcidin;SDS-PAGE電泳顯示,誘導錶達hepcidin蛋白分子質量約10 ku,超濾純化後蛋白濃度達177.8 mg·L-1;抑菌結果錶明,該錶達產物對金黃色葡萄毬菌、枯草芽孢桿菌、無乳鏈毬菌均有較好的抗菌活性.
근거GenBank상마속항균태hepcidin적안기산서렬,설계병합성전장279 bp적hepcidin기인,장해기인삽입pPICZαA중구건진핵표체재체,PCR감정적양성질립전전화필적효모균X-33,용불동농도Zeocin사선고고패양성중조균,갑순유도표체,표체상청액경초려막순화후,이용SDS-PAGE전영화억균시험진행감정.결과표명:PCR검측화기인측서표명hepcidin기인합성정학,성공구건진핵표체재체pPICZαA-hepcidin;SDS-PAGE전영현시,유도표체hepcidin단백분자질량약10 ku,초려순화후단백농도체177.8 mg·L-1;억균결과표명,해표체산물대금황색포도구균、고초아포간균、무유련구균균유교호적항균활성.
