中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
83-86
,共4页
刘蒙蒙%杨德成%周国辉%梁特%于力
劉矇矇%楊德成%週國輝%樑特%于力
류몽몽%양덕성%주국휘%량특%우력
口蹄疫病毒%重组人腺病毒5型%绿色荧光蛋白
口蹄疫病毒%重組人腺病毒5型%綠色熒光蛋白
구제역병독%중조인선병독5형%록색형광단백
为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间.重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表达.应用FMDV的VP2单克隆抗体4B2对重组病毒感染细胞进行western blot检测,反应条带与FMDV衣壳蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,表明FMDV的完整衣壳蛋白和3C蛋白酶也均获得表达,而且EGFP的插入并未影响P1蛋白的表达和3C蛋白酶对P1的正确切割.重组腺病毒的生长特性分析表明,EGFP的插入也未影响该重组腺病毒的增殖特性.上述研究结果显示,表达FMDV衣壳蛋白P12A3C的重组腺病毒可以作为载体,以2A蛋白作为Linker表达一个小分子蛋白,为改进以腺病毒为载体的口蹄疫基因工程疫苗提供了新思路.
為構建錶達O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重組腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列為Linker,將報告基因EGFP插入FMDV的P12A與3C之間.重組腺病毒感染HEK-293細胞後可以觀察到綠色熒光,錶明EGFP蛋白穫得錶達.應用FMDV的VP2單剋隆抗體4B2對重組病毒感染細胞進行western blot檢測,反應條帶與FMDV衣殼蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,錶明FMDV的完整衣殼蛋白和3C蛋白酶也均穫得錶達,而且EGFP的插入併未影響P1蛋白的錶達和3C蛋白酶對P1的正確切割.重組腺病毒的生長特性分析錶明,EGFP的插入也未影響該重組腺病毒的增殖特性.上述研究結果顯示,錶達FMDV衣殼蛋白P12A3C的重組腺病毒可以作為載體,以2A蛋白作為Linker錶達一箇小分子蛋白,為改進以腺病毒為載體的口蹄疫基因工程疫苗提供瞭新思路.
위구건표체O형구제역병독(FMDV)적P12A3C기인급GFP기인적중조선병독rAdV-P12aEGFP2a3C,본연구이FMDV적2A기인서렬위Linker,장보고기인EGFP삽입FMDV적P12A여3C지간.중조선병독감염HEK-293세포후가이관찰도록색형광,표명EGFP단백획득표체.응용FMDV적VP2단극륭항체4B2대중조병독감염세포진행western blot검측,반응조대여FMDV의각단백VP0화VP3적분자량대소상부,표명FMDV적완정의각단백화3C단백매야균획득표체,이차EGFP적삽입병미영향P1단백적표체화3C단백매대P1적정학절할.중조선병독적생장특성분석표명,EGFP적삽입야미영향해중조선병독적증식특성.상술연구결과현시,표체FMDV의각단백P12A3C적중조선병독가이작위재체,이2A단백작위Linker표체일개소분자단백,위개진이선병독위재체적구제역기인공정역묘제공료신사로.
