CAJ | 학술논문

[目的]探讨Akt抑制剂124005对人鼻咽癌细胞CNE1放射增敏效应及其潜在机制.[方法]CCK8法检测不同浓度124005对人鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,计算IC50值,选择低于IC50的药物浓度作为增敏浓度.集落形成实验检测放射线加或不加124005以及124005+放射线组联合或不联合自噬抑制剂3-MA对CNE1细胞生存曲线的影响.间接免疫荧光法检测y-H2AX观察DNA损伤修复和GFP-LC3转染CNE1中自噬标志物LC3的聚集.流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡.免疫印迹法(Weste m blot)检测Caspase-3、PARP、Beclin 1和LC3-Ⅱ的表达,并检测AKT及下游信号通路的表达,探索Akt抑制剂124005放射增敏效应及其潜在机制.[结果]124005对CNE1 IC50值为30.5μμmol/L.集落形成实验显示,DEF值放疗+8μmol/L124005持续用药组为1.92,放疗+12.5μmol/L124005用药72h组为1.12,共聚焦显微镜观察显示124005联合放疔显著增加了CNE1细胞照射后细胞核内y-H2AX焦点的聚集和转染GFP-LC3质粒的CNE1细胞内LC3的点状聚集.流式检测124005可以明显提高放射线诱导的CNE1细胞凋亡,凋亡率最高达52.9％.Western blot显示124005可以显著抑制放射后p-AKT及下游p-GSK-31β和p-PRAS40的表达,增加放射引起的cleaved caspase-3和cleaved PARP以及Beclin1和 LC3-Ⅱ的表达.应用3-MA可降低124005处理后LC3-Ⅱ的表达水平.放射+124005再联用3mmol/L3-MA组的DEF值为1.69,明显低于单纯放射+124005组(DEF=1.97).[结论]124005通过对AKT以及下游通路的抑制,抑制DNA损伤修复,同时增加凋亡和自噬来起到对CNE1细胞株放射增敏的效应.
[목적]탐토Akt억제제124005대인비인암세포CNE1방사증민효응급기잠재궤제.[방법]CCK8법검측불동농도124005대인비인암CNE1세포적억제작용,계산IC50치,선택저우IC50적약물농도작위증민농도.집락형성실험검측방사선가혹불가124005이급124005+방사선조연합혹불연합자서억제제3-MA대CNE1세포생존곡선적영향.간접면역형광법검측y-H2AX관찰DNA손상수복화GFP-LC3전염CNE1중자서표지물LC3적취집.류식세포술검측세포주기분포화조망.면역인적법(Weste m blot)검측Caspase-3、PARP、Beclin 1화LC3-Ⅱ적표체,병검측AKT급하유신호통로적표체,탐색Akt억제제124005방사증민효응급기잠재궤제.[결과]124005대CNE1 IC50치위30.5μμmol/L.집락형성실험현시,DEF치방료+8μmol/L124005지속용약조위1.92,방료+12.5μmol/L124005용약72h조위1.12,공취초현미경관찰현시124005연합방정현저증가료CNE1세포조사후세포핵내y-H2AX초점적취집화전염GFP-LC3질립적CNE1세포내LC3적점상취집.류식검측124005가이명현제고방사선유도적CNE1세포조망,조망솔최고체52.9％.Western blot현시124005가이현저억제방사후p-AKT급하유p-GSK-31β화p-PRAS40적표체,증가방사인기적cleaved caspase-3화cleaved PARP이급Beclin1화 LC3-Ⅱ적표체.응용3-MA가강저124005처리후LC3-Ⅱ적표체수평.방사+124005재련용3mmol/L3-MA조적DEF치위1.69,명현저우단순방사+124005조(DEF=1.97).[결론]124005통과대AKT이급하유통로적억제,억제DNA손상수복,동시증가조망화자서래기도대CNE1세포주방사증민적효응.