中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2004年
1期
43-46
,共4页
黄薇%刘颖%段丹丽%李海山%刘勇%洪坤学%朱家鸿%邵一鸣
黃薇%劉穎%段丹麗%李海山%劉勇%洪坤學%硃傢鴻%邵一鳴
황미%류영%단단려%리해산%류용%홍곤학%주가홍%소일명
疫苗,减毒%痘苗病毒%遗传载体%受体,干扰素%基因缺失
疫苗,減毒%痘苗病毒%遺傳載體%受體,榦擾素%基因缺失
역묘,감독%두묘병독%유전재체%수체,간우소%기인결실
目的构建缺失IFN-γ受体基因的天坛株重组痘苗病毒载体,初步研究其毒力的改变及B8R缺失区插入外源基因表达的稳定性.为研制表达多价抗原重组痘苗病毒载体、提高痘苗病毒载体安全性进行探索.方法采用PCR技术、多步克隆构建带有天坛株痘苗病毒B8R基因外左右侧同源臂、痘苗病毒启动子序列pE/L、p7.5及下游LacZ序列的转移质粒pSKB8R、pSKB8RLacZ.将痘苗病毒VTT与转移质粒pSKB8RLacZ共转染CEF细胞进行同源重组,经蓝白斑筛选、连续单斑纯化、鉴定获得B8R基因(IFN-γ受体基因同源序列)缺失为LacZ所取代的重组病毒VTT△B8RLacZ.结果经酶切、测序鉴定转移质粒构建正确,核酸水平、外源基因生物学活性检测表明VTT△B8RLacZ在CEF细胞连续培养传代中B8R基因的缺失和插入外源基因LacZ表达均很稳定.VTT△B8RLacZ在细胞中的繁殖复制水平与VTT相当.兔皮内毒力实验表明B8R基因缺失显著降低VTT的毒力.结论本研究表明B8R基因缺失可显著降低痘苗病毒天坛株的毒力并可作为外源基因的插入区,缺失B8R基因的重组痘苗病毒可能作为新一代的表达多价抗原痘苗病毒载体.
目的構建缺失IFN-γ受體基因的天罈株重組痘苗病毒載體,初步研究其毒力的改變及B8R缺失區插入外源基因錶達的穩定性.為研製錶達多價抗原重組痘苗病毒載體、提高痘苗病毒載體安全性進行探索.方法採用PCR技術、多步剋隆構建帶有天罈株痘苗病毒B8R基因外左右側同源臂、痘苗病毒啟動子序列pE/L、p7.5及下遊LacZ序列的轉移質粒pSKB8R、pSKB8RLacZ.將痘苗病毒VTT與轉移質粒pSKB8RLacZ共轉染CEF細胞進行同源重組,經藍白斑篩選、連續單斑純化、鑒定穫得B8R基因(IFN-γ受體基因同源序列)缺失為LacZ所取代的重組病毒VTT△B8RLacZ.結果經酶切、測序鑒定轉移質粒構建正確,覈痠水平、外源基因生物學活性檢測錶明VTT△B8RLacZ在CEF細胞連續培養傳代中B8R基因的缺失和插入外源基因LacZ錶達均很穩定.VTT△B8RLacZ在細胞中的繁殖複製水平與VTT相噹.兔皮內毒力實驗錶明B8R基因缺失顯著降低VTT的毒力.結論本研究錶明B8R基因缺失可顯著降低痘苗病毒天罈株的毒力併可作為外源基因的插入區,缺失B8R基因的重組痘苗病毒可能作為新一代的錶達多價抗原痘苗病毒載體.
목적구건결실IFN-γ수체기인적천단주중조두묘병독재체,초보연구기독력적개변급B8R결실구삽입외원기인표체적은정성.위연제표체다개항원중조두묘병독재체、제고두묘병독재체안전성진행탐색.방법채용PCR기술、다보극륭구건대유천단주두묘병독B8R기인외좌우측동원비、두묘병독계동자서렬pE/L、p7.5급하유LacZ서렬적전이질립pSKB8R、pSKB8RLacZ.장두묘병독VTT여전이질립pSKB8RLacZ공전염CEF세포진행동원중조,경람백반사선、련속단반순화、감정획득B8R기인(IFN-γ수체기인동원서렬)결실위LacZ소취대적중조병독VTT△B8RLacZ.결과경매절、측서감정전이질립구건정학,핵산수평、외원기인생물학활성검측표명VTT△B8RLacZ재CEF세포련속배양전대중B8R기인적결실화삽입외원기인LacZ표체균흔은정.VTT△B8RLacZ재세포중적번식복제수평여VTT상당.토피내독력실험표명B8R기인결실현저강저VTT적독력.결론본연구표명B8R기인결실가현저강저두묘병독천단주적독력병가작위외원기인적삽입구,결실B8R기인적중조두묘병독가능작위신일대적표체다개항원두묘병독재체.
