中华流行病学杂志
中華流行病學雜誌
중화류행병학잡지
CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY
2006年
3期
249-252
,共4页
慢病毒疫苗%马传染性贫血病毒%感染性分子克隆%囊膜基因
慢病毒疫苗%馬傳染性貧血病毒%感染性分子剋隆%囊膜基因
만병독역묘%마전염성빈혈병독%감염성분자극륭%낭막기인
目的构建单周期复制的马传染性贫血病毒(EIAV)重组疫苗.方法将感染性EIAV分子克隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中克隆4个拷贝的Mason Pfizer猴病毒组成性RNA转运因子(CTE),构建重组质粒pGPTC;构建另一表达Env蛋白的重组质粒pTEB,并分别与重组质粒pGPT、pGPTC共转染进入293细胞;以Western blot对转染细胞外培养液进行检测以鉴定病毒粒子的产生;通过免疫荧光分析鉴定感染细胞内病毒蛋白的表达.结果pGPTC/pTEB共转染的细胞外培养液中检测到特异性EIAV病毒蛋白,而pGPT/pTEB共转染的细胞外培养液中没有检测到特异性EIAV病毒蛋白.转染细胞产生的病毒粒子EIAVGPTC感染的原代马肾细胞(EK)内检测到病毒蛋白的表达,而用感染细胞产生的病毒粒子再感染EK细胞,则无病毒蛋白表达.结论Rev/RRE对于病毒结构蛋白的表达是必需的;CTE可以替代Rev蛋白功能辅助EIAV结构蛋白的表达;转染的293细胞产生了EIAV病毒粒子并分泌到胞外培养液中;产生的病毒粒子EIAVGpTC是一复制缺陷的活重组病毒.
目的構建單週期複製的馬傳染性貧血病毒(EIAV)重組疫苗.方法將感染性EIAV分子剋隆WU57囊膜(env)基因敲除,在pGPT中剋隆4箇拷貝的Mason Pfizer猴病毒組成性RNA轉運因子(CTE),構建重組質粒pGPTC;構建另一錶達Env蛋白的重組質粒pTEB,併分彆與重組質粒pGPT、pGPTC共轉染進入293細胞;以Western blot對轉染細胞外培養液進行檢測以鑒定病毒粒子的產生;通過免疫熒光分析鑒定感染細胞內病毒蛋白的錶達.結果pGPTC/pTEB共轉染的細胞外培養液中檢測到特異性EIAV病毒蛋白,而pGPT/pTEB共轉染的細胞外培養液中沒有檢測到特異性EIAV病毒蛋白.轉染細胞產生的病毒粒子EIAVGPTC感染的原代馬腎細胞(EK)內檢測到病毒蛋白的錶達,而用感染細胞產生的病毒粒子再感染EK細胞,則無病毒蛋白錶達.結論Rev/RRE對于病毒結構蛋白的錶達是必需的;CTE可以替代Rev蛋白功能輔助EIAV結構蛋白的錶達;轉染的293細胞產生瞭EIAV病毒粒子併分泌到胞外培養液中;產生的病毒粒子EIAVGpTC是一複製缺陷的活重組病毒.
목적구건단주기복제적마전염성빈혈병독(EIAV)중조역묘.방법장감염성EIAV분자극륭WU57낭막(env)기인고제,재pGPT중극륭4개고패적Mason Pfizer후병독조성성RNA전운인자(CTE),구건중조질립pGPTC;구건령일표체Env단백적중조질립pTEB,병분별여중조질립pGPT、pGPTC공전염진입293세포;이Western blot대전염세포외배양액진행검측이감정병독입자적산생;통과면역형광분석감정감염세포내병독단백적표체.결과pGPTC/pTEB공전염적세포외배양액중검측도특이성EIAV병독단백,이pGPT/pTEB공전염적세포외배양액중몰유검측도특이성EIAV병독단백.전염세포산생적병독입자EIAVGPTC감염적원대마신세포(EK)내검측도병독단백적표체,이용감염세포산생적병독입자재감염EK세포,칙무병독단백표체.결론Rev/RRE대우병독결구단백적표체시필수적;CTE가이체대Rev단백공능보조EIAV결구단백적표체;전염적293세포산생료EIAV병독입자병분비도포외배양액중;산생적병독입자EIAVGpTC시일복제결함적활중조병독.
