CAJ | 학술논문

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARS-CoV N抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARS-CoV感染的早期诊断.方法用基因重组SARS-CoV N蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验,建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARS-CoV N抗原.结果获得9株特异性针对SARS-CoV N蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体,通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验,筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体,与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体,建立了抗体夹心ELISA法,测定重组SARS-CoV N蛋白最高灵敏度为50 pg/ml,特异性达99.86%,测定420份血清学确诊的SARS患者血清,其中发病1-10天阳性检出率为90.1%,11-20天检出率为23%,21天以上均为阴性,与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应.结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的SARS-CoV抗原的ELISA捕捉法,可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究.
목적제비화감정엄중급성호흡종합정관상병독(SARS-CoV)핵의각(N)단백단극륭항체(mAb)화다극륭항체건립SARS-CoV N항원포획항체협심매련면역흡부시험(ELISA)방법용우SARS-CoV감염적조기진단.방법용기인중조SARS-CoV N단백면역BALB/c소서화신서란대백토제비mAb화다극륭항체,채용ELISA간접법、면역형광화면역인적진행사선화감정,용단극륭항체여토다극륭항체진행배대시험,건립항원포획항체협심ELISA법측정SARS-CoV N항원.결과획득9주특이성침대SARS-CoV N단백적mAb화고효개적토다극륭항체,통과고친화력적mAb여토다항적배대시험,사선출3주단항N1E8、N8E1화N10E4혼합작위포획항체,여토다극륭항체화랄근과양화물매표기양항토IgG조합작위측정항체,건립료항체협심ELISA법,측정중조SARS-CoV N단백최고령민도위50 pg/ml,특이성체99.86%,측정420빈혈청학학진적SARS환자혈청,기중발병1-10천양성검출솔위90.1%,11-20천검출솔위23%,21천이상균위음성,여기타호흡도병독화관상병독무교차반응.결론획득특이성호、친화력고적단극륭항체화고효개적토다극륭항체,경과항체적배대화우화,건립료일충령민도고、특이성강적SARS-CoV항원적ELISA포착법,가응용우SARS조기진단、소원급류행병학연구.