食品与发酵工业
食品與髮酵工業
식품여발효공업
FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
2004年
4期
17-21
,共5页
唐名山%王树英%陈坚%李华钟
唐名山%王樹英%陳堅%李華鐘
당명산%왕수영%진견%리화종
谷氨酰胺转胺酶%Streptoverticillium mobaraense,大肠杆菌%纯化%复性
穀氨酰胺轉胺酶%Streptoverticillium mobaraense,大腸桿菌%純化%複性
곡안선알전알매%Streptoverticillium mobaraense,대장간균%순화%복성
以基因组DNA为模板,利用PCR技术从茂原轮链丝菌(Streptoverticillium mobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg,克隆于表达载体pQE-30T,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG,将此重组质粒转化到受体菌E.coli M15 中.对质粒稳定性的研究表明,E.coli M15 在无选择压的情况下,于37℃连续转接5次,质粒丢失率仅有24%,说明质粒基本稳定.重组菌经IPTG诱导,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的18%,经SDS-PAGE分析,表达的蛋白质的分子质量为38 ku,与预期分子质量相符.表达产物主要以包涵体的形式存在.细胞经超声破碎,离心取包涵体溶于8 mol/L的尿素中,然后通过Ni-NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性.目的蛋白的纯度可达95%以上.比酶活为10.3U/mg.
以基因組DNA為模闆,利用PCR技術從茂原輪鏈絲菌(Streptoverticillium mobaraense)中擴增得到產成熟穀氨酰胺轉胺酶MTG的結構基因mtg,剋隆于錶達載體pQE-30T,構建成lac啟動子控製下的His6融閤錶達質粒pMTG,將此重組質粒轉化到受體菌E.coli M15 中.對質粒穩定性的研究錶明,E.coli M15 在無選擇壓的情況下,于37℃連續轉接5次,質粒丟失率僅有24%,說明質粒基本穩定.重組菌經IPTG誘導,錶達的重組穀氨酰胺轉胺酶佔菌體總蛋白的18%,經SDS-PAGE分析,錶達的蛋白質的分子質量為38 ku,與預期分子質量相符.錶達產物主要以包涵體的形式存在.細胞經超聲破碎,離心取包涵體溶于8 mol/L的尿素中,然後通過Ni-NTA親和柱分離純化和稀釋法複性.目的蛋白的純度可達95%以上.比酶活為10.3U/mg.
이기인조DNA위모판,이용PCR기술종무원륜련사균(Streptoverticillium mobaraense)중확증득도산성숙곡안선알전알매MTG적결구기인mtg,극륭우표체재체pQE-30T,구건성lac계동자공제하적His6융합표체질립pMTG,장차중조질립전화도수체균E.coli M15 중.대질립은정성적연구표명,E.coli M15 재무선택압적정황하,우37℃련속전접5차,질립주실솔부유24%,설명질립기본은정.중조균경IPTG유도,표체적중조곡안선알전알매점균체총단백적18%,경SDS-PAGE분석,표체적단백질적분자질량위38 ku,여예기분자질량상부.표체산물주요이포함체적형식존재.세포경초성파쇄,리심취포함체용우8 mol/L적뇨소중,연후통과Ni-NTA친화주분리순화화희석법복성.목적단백적순도가체95%이상.비매활위10.3U/mg.
