分子诊断与治疗杂志
分子診斷與治療雜誌
분자진단여치료잡지
JOURNAL OF MOLECULAR DIAGNOSIS AND THERAPY
2012年
3期
163-166
,共4页
龚青%徐进文%徐祖敏%高国全
龔青%徐進文%徐祖敏%高國全
공청%서진문%서조민%고국전
载体%PPARγ%RNAi
載體%PPARγ%RNAi
재체%PPARγ%RNAi
目的 构建表达细胞转录因子PPARγ的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究PPARγ参与的细胞信号通路以及PPARγ为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNA干扰质粒.方法 选取PPAR γ基因的19nt特异性序列,设计针对PPARγ的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,用EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将包含PPARγ基因的RNAi重组载体转染前列腺癌细胞PC-3.转染48 h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组PPARγ蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确；含PPARγ基因的RNAi载体转染前列腺癌细胞PC-3细胞成功；Westernblotting结果显示,与空质粒对照组相比,转染组细胞PPARγ表达下调.结论 成功构建含人PPARγ基因的RNAi载体,为研究PPARγ参与的细胞信号通路提供了稳定转染的RNA干扰质粒.同时,阻断PPAR γ的信号通路将为基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以PPARγ为靶点的基因治疗提供了有利工具.
目的 構建錶達細胞轉錄因子PPARγ的RNA榦擾(RNAi)質粒,為研究PPARγ參與的細胞信號通路以及PPARγ為靶點的基因治療提供穩定轉染的RNA榦擾質粒.方法 選取PPAR γ基因的19nt特異性序列,設計針對PPARγ的shRNA序列,應用基因重組技術剋隆到pSilencer 1.0-U6錶達載體中,用EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ進行雙酶切和DNA測序鑒定重組剋隆,在脂質體的介導下將包含PPARγ基因的RNAi重組載體轉染前列腺癌細胞PC-3.轉染48 h後,收集細胞裂解液,Western blotting分析對照組與轉染組PPARγ蛋白的錶達水平.結果 雙酶切證實shRNA正確插入pSilencer 1.0-U6質粒,DNA測序證實插入的序列正確；含PPARγ基因的RNAi載體轉染前列腺癌細胞PC-3細胞成功；Westernblotting結果顯示,與空質粒對照組相比,轉染組細胞PPARγ錶達下調.結論 成功構建含人PPARγ基因的RNAi載體,為研究PPARγ參與的細胞信號通路提供瞭穩定轉染的RNA榦擾質粒.同時,阻斷PPAR γ的信號通路將為基因治療提供一箇較好的靶點,研究結果為以PPARγ為靶點的基因治療提供瞭有利工具.
목적 구건표체세포전록인자PPARγ적RNA간우(RNAi)질립,위연구PPARγ삼여적세포신호통로이급PPARγ위파점적기인치료제공은정전염적RNA간우질립.방법 선취PPAR γ기인적19nt특이성서렬,설계침대PPARγ적shRNA서렬,응용기인중조기술극륭도pSilencer 1.0-U6표체재체중,용EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ진행쌍매절화DNA측서감정중조극륭,재지질체적개도하장포함PPARγ기인적RNAi중조재체전염전렬선암세포PC-3.전염48 h후,수집세포렬해액,Western blotting분석대조조여전염조PPARγ단백적표체수평.결과 쌍매절증실shRNA정학삽입pSilencer 1.0-U6질립,DNA측서증실삽입적서렬정학；함PPARγ기인적RNAi재체전염전렬선암세포PC-3세포성공；Westernblotting결과현시,여공질립대조조상비,전염조세포PPARγ표체하조.결론 성공구건함인PPARγ기인적RNAi재체,위연구PPARγ삼여적세포신호통로제공료은정전염적RNA간우질립.동시,조단PPAR γ적신호통로장위기인치료제공일개교호적파점,연구결과위이PPARγ위파점적기인치료제공료유리공구.
