山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
4期
30-32,35
,共4页
霍晓川%罗俊生%孙霄云%关宁%张振兴%郭闻师
霍曉川%囉俊生%孫霄雲%關寧%張振興%郭聞師
곽효천%라준생%손소운%관저%장진흥%곽문사
结缔组织生长因子%腺病毒%载体%血管平滑肌细胞%迁移
結締組織生長因子%腺病毒%載體%血管平滑肌細胞%遷移
결체조직생장인자%선병독%재체%혈관평활기세포%천이
目的 构建结缔组织生长因子(CTGF)腺病毒载体并观察其对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响.方法 将CTGF基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CTGF,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组体质粒pAd-CTGF,酶切后用转染HEK293细胞包装成重组体腺病毒Ad-CTGF,扩增和纯化后PCR鉴定.应用Ad-CTGF感染VSMCs,划痕实验观察上调CTGF表达对VSMCs迁移的影响.结果 Ad-CTGF感染HEK293细胞后,随时间增加HEK293细胞表达绿色荧光的量也增加.PCR鉴定重组腺病毒Ad-CTGF电泳结果显示,1047 bp附近有一条带,与目的片段相符合,CTGF碱基序列经测序正确.Ad-CTGF感染VSMCs后CTGF高表达,创口愈合指数明显提高,VSMCs迁移受到明显提升.结论 成功构建了携带CTGF基因的重组腺病毒载体,上调CTGF表达可以明显增加VSMCs的迁移能力.
目的 構建結締組織生長因子(CTGF)腺病毒載體併觀察其對血管平滑肌細胞(VSMCs)遷移的影響.方法 將CTGF基因整閤入腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV中,構建重組穿梭質粒pAdTrack-CTGF,線性化後與pAdeasy-1在大腸桿菌BJ5183中進行同源重組,穫得含目的基因的重組體質粒pAd-CTGF,酶切後用轉染HEK293細胞包裝成重組體腺病毒Ad-CTGF,擴增和純化後PCR鑒定.應用Ad-CTGF感染VSMCs,劃痕實驗觀察上調CTGF錶達對VSMCs遷移的影響.結果 Ad-CTGF感染HEK293細胞後,隨時間增加HEK293細胞錶達綠色熒光的量也增加.PCR鑒定重組腺病毒Ad-CTGF電泳結果顯示,1047 bp附近有一條帶,與目的片段相符閤,CTGF堿基序列經測序正確.Ad-CTGF感染VSMCs後CTGF高錶達,創口愈閤指數明顯提高,VSMCs遷移受到明顯提升.結論 成功構建瞭攜帶CTGF基因的重組腺病毒載體,上調CTGF錶達可以明顯增加VSMCs的遷移能力.
목적 구건결체조직생장인자(CTGF)선병독재체병관찰기대혈관평활기세포(VSMCs)천이적영향.방법 장CTGF기인정합입선병독천사질립pAdTrack-CMV중,구건중조천사질립pAdTrack-CTGF,선성화후여pAdeasy-1재대장간균BJ5183중진행동원중조,획득함목적기인적중조체질립pAd-CTGF,매절후용전염HEK293세포포장성중조체선병독Ad-CTGF,확증화순화후PCR감정.응용Ad-CTGF감염VSMCs,화흔실험관찰상조CTGF표체대VSMCs천이적영향.결과 Ad-CTGF감염HEK293세포후,수시간증가HEK293세포표체록색형광적량야증가.PCR감정중조선병독Ad-CTGF전영결과현시,1047 bp부근유일조대,여목적편단상부합,CTGF감기서렬경측서정학.Ad-CTGF감염VSMCs후CTGF고표체,창구유합지수명현제고,VSMCs천이수도명현제승.결론 성공구건료휴대CTGF기인적중조선병독재체,상조CTGF표체가이명현증가VSMCs적천이능력.
