中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
12期
1114-1117
,共4页
石杜娟%徐元宏%胡元生%周银娣%刘丽丽%钟政荣%罗庆礼%沈继龙
石杜娟%徐元宏%鬍元生%週銀娣%劉麗麗%鐘政榮%囉慶禮%瀋繼龍
석두연%서원굉%호원생%주은제%류려려%종정영%라경례%침계룡
日本血吸虫%酪氨酸羟化酶%真核表达
日本血吸蟲%酪氨痠羥化酶%真覈錶達
일본혈흡충%락안산간화매%진핵표체
目的 扩增日本血吸虫的酪氨酸羟化酶(Schistosoma japonicum Tyrosine Hydroxylase,SjTH)编码基因,构建pcDNA3.1(+)-SjTH真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达情况.方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板,RACE PCR扩增SjTH编码基因,并与pGEM-T连接进行亚克隆,双酶切后回收目的基因,并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,PCR和双酶切初步鉴定后测序,纯化无内毒素重组质粒pcDNA3.1(+)-SjTH,转染入COS-7细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和Western blot鉴定重组SjTH蛋白的表达.结果 RACE PCR 扩增出SjTH编码基因,大小约1 392bp,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组真核质粒构建成功.脂质体介导无内毒重组真核质粒pcDNA3.1(+)-SjTH转染入COS-7细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR证实阳性单克隆细胞带有SjTH编码基因,Western blot鉴定单克隆细胞表达重组SjTH蛋白,大小约54kD.结论 真核表达载体pcDNA3.1(+)-SjTH构建成功,G418筛选出阳性克隆,真核表达重组SjTH蛋白,为后续研究SjTH蛋白功能奠定基础.
目的 擴增日本血吸蟲的酪氨痠羥化酶(Schistosoma japonicum Tyrosine Hydroxylase,SjTH)編碼基因,構建pcDNA3.1(+)-SjTH真覈錶達載體,併檢測其在COS-7細胞中的錶達情況.方法 以日本血吸蟲成蟲cDNA為模闆,RACE PCR擴增SjTH編碼基因,併與pGEM-T連接進行亞剋隆,雙酶切後迴收目的基因,併與真覈錶達載體pcDNA3.1(+)連接,PCR和雙酶切初步鑒定後測序,純化無內毒素重組質粒pcDNA3.1(+)-SjTH,轉染入COS-7細胞,G418篩選暘性剋隆,RT-PCR和Western blot鑒定重組SjTH蛋白的錶達.結果 RACE PCR 擴增齣SjTH編碼基因,大小約1 392bp,經雙酶切鑒定、測序及Blast分析鑒定重組真覈質粒構建成功.脂質體介導無內毒重組真覈質粒pcDNA3.1(+)-SjTH轉染入COS-7細胞,G418篩選齣暘性剋隆,RT-PCR證實暘性單剋隆細胞帶有SjTH編碼基因,Western blot鑒定單剋隆細胞錶達重組SjTH蛋白,大小約54kD.結論 真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-SjTH構建成功,G418篩選齣暘性剋隆,真覈錶達重組SjTH蛋白,為後續研究SjTH蛋白功能奠定基礎.
목적 확증일본혈흡충적락안산간화매(Schistosoma japonicum Tyrosine Hydroxylase,SjTH)편마기인,구건pcDNA3.1(+)-SjTH진핵표체재체,병검측기재COS-7세포중적표체정황.방법 이일본혈흡충성충cDNA위모판,RACE PCR확증SjTH편마기인,병여pGEM-T련접진행아극륭,쌍매절후회수목적기인,병여진핵표체재체pcDNA3.1(+)련접,PCR화쌍매절초보감정후측서,순화무내독소중조질립pcDNA3.1(+)-SjTH,전염입COS-7세포,G418사선양성극륭,RT-PCR화Western blot감정중조SjTH단백적표체.결과 RACE PCR 확증출SjTH편마기인,대소약1 392bp,경쌍매절감정、측서급Blast분석감정중조진핵질립구건성공.지질체개도무내독중조진핵질립pcDNA3.1(+)-SjTH전염입COS-7세포,G418사선출양성극륭,RT-PCR증실양성단극륭세포대유SjTH편마기인,Western blot감정단극륭세포표체중조SjTH단백,대소약54kD.결론 진핵표체재체pcDNA3.1(+)-SjTH구건성공,G418사선출양성극륭,진핵표체중조SjTH단백,위후속연구SjTH단백공능전정기출.
