CAJ | 학술논문

目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响.方法:根据RegIα cDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致.将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株.通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化.结果:成功构建RegIα cDNA的全序列表达质粒.RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIα mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05).结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力.
목적:구건재생단백Iα(regeneration gene Iα,RegIα)적cDNA과표체질립표체재체,재체외평개기대위암세포주증식급기조망적영향.방법:근거RegIα cDNA적전서렬설계인물,용RT-PCR적방법종위점막조직적총RNA중획취RegIα적cDNA편마구역적전서렬,경측서기여목적기인서렬일치.장획취적RegIα서렬경TA극륭화아극륭지pIRES2-EGFP진핵표체질립재체중;장구건적RegIα과표체질립재체pIRES2-RegIα-EGFP전염위암세포주MKN28,병용공재체pIRES2-EGFP작위대조,이용G418사선은정표체pIRES2-RegIα-EGFP적MKN28세포주.통과RT-PCR급Western blot검측전염후세포RegIα재mRNA급단백질수평적표체;MTT법화류식세포의분별검측RegIα과표체후MKN28세포증식급길항H2O2유도조망적변화.결과:성공구건RegIα cDNA적전서렬표체질립.RT-PCR급Western blot검측현시:전염pIRES2-EGFP질립적MKN28세포RegIα mRNA급단백표체수평명현승고(P<0.05);MTT시험현시:전염후세포증식능력명현승고(P<0.05),이차길항H2O2조망적능력증강(P<0.05).결론:RegIα적과표체능명현증강위암세포MKN28적증식화길항H2O2유도조망적능력.