中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
7期
579-582
,共4页
登革病毒%包膜蛋白%蛋白表达纯化%免疫原性
登革病毒%包膜蛋白%蛋白錶達純化%免疫原性
등혁병독%포막단백%단백표체순화%면역원성
目的:Ⅱ型登革病毒临床分离突变株(B株)E基因区部分序列的原核表达载体构建,蛋白表达、复性和纯化,及其免疫原性的初探.方法:将B株E基因1～476 bp序列克隆入原核表达载体pET28a(+),经酶切、测序鉴定正确后转入表达菌,IPTG诱导后将包涵体变性,复性,纯化后的蛋白免疫C57BL/6和BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并通过Western blot和ELISA进行抗体鉴定.结果:成功构建了pET28a(+)-B-E原核表达载体,在表达菌中以包涵体形式稳定高表达,分子量为20 kD.利用蛋白的His标签进行Western blot鉴定确定该蛋白为重组B-E蛋白,得到的可溶蛋白纯度大于90%.B-E蛋白免疫BALB/c和C57BL/6小鼠均可以得到有效的多克隆抗体.结论:B-E蛋白对BALB/c和C57BL/6小鼠具有免疫原性,其中ELISA鉴定免疫C57BL/6小鼠抗体的滴度为1∶12 800,Western blot鉴定免疫BALB/c小鼠抗体滴度为1∶500.
目的:Ⅱ型登革病毒臨床分離突變株(B株)E基因區部分序列的原覈錶達載體構建,蛋白錶達、複性和純化,及其免疫原性的初探.方法:將B株E基因1～476 bp序列剋隆入原覈錶達載體pET28a(+),經酶切、測序鑒定正確後轉入錶達菌,IPTG誘導後將包涵體變性,複性,純化後的蛋白免疫C57BL/6和BALB/c小鼠製備多剋隆抗體,併通過Western blot和ELISA進行抗體鑒定.結果:成功構建瞭pET28a(+)-B-E原覈錶達載體,在錶達菌中以包涵體形式穩定高錶達,分子量為20 kD.利用蛋白的His標籤進行Western blot鑒定確定該蛋白為重組B-E蛋白,得到的可溶蛋白純度大于90%.B-E蛋白免疫BALB/c和C57BL/6小鼠均可以得到有效的多剋隆抗體.結論:B-E蛋白對BALB/c和C57BL/6小鼠具有免疫原性,其中ELISA鑒定免疫C57BL/6小鼠抗體的滴度為1∶12 800,Western blot鑒定免疫BALB/c小鼠抗體滴度為1∶500.
목적:Ⅱ형등혁병독림상분리돌변주(B주)E기인구부분서렬적원핵표체재체구건,단백표체、복성화순화,급기면역원성적초탐.방법:장B주E기인1～476 bp서렬극륭입원핵표체재체pET28a(+),경매절、측서감정정학후전입표체균,IPTG유도후장포함체변성,복성,순화후적단백면역C57BL/6화BALB/c소서제비다극륭항체,병통과Western blot화ELISA진행항체감정.결과:성공구건료pET28a(+)-B-E원핵표체재체,재표체균중이포함체형식은정고표체,분자량위20 kD.이용단백적His표첨진행Western blot감정학정해단백위중조B-E단백,득도적가용단백순도대우90%.B-E단백면역BALB/c화C57BL/6소서균가이득도유효적다극륭항체.결론:B-E단백대BALB/c화C57BL/6소서구유면역원성,기중ELISA감정면역C57BL/6소서항체적적도위1∶12 800,Western blot감정면역BALB/c소서항체적도위1∶500.
