重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2010年
18期
2397-2399
,共3页
杨海波%柳静%王莲哲%廖春丽%陈兰英
楊海波%柳靜%王蓮哲%廖春麗%陳蘭英
양해파%류정%왕련철%료춘려%진란영
肝型脂肪酸结合蛋白%原核表达%纯化
肝型脂肪痠結閤蛋白%原覈錶達%純化
간형지방산결합단백%원핵표체%순화
目的 克隆肝型脂肪酸结合蛋白(LFABP)基因,构建其原核表达载体,并进行表达、纯化及鉴定.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法从cDNA中扩增出LFABP基因片段,通过酶切和连接,构建原核表达载体pET-m-LFABP,转化入E.Coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;应用亲和层析、凝胶过滤层析和 Lipidex1000 凝胶层析分级纯化目的蛋白.圆二色谱分析检测目的蛋白的二级结构和热稳定性.结果 SDS-PAGE 分析表明,表达产物的相对分子质量约为15×103,与理论值相一致;应用亲和层析、凝胶过滤层析和 Lipidex1000 凝胶层析分级纯化目的蛋白,得到纯度较高的蛋白.蛋白的圆二色谱分析表明在大肠杆菌中表达的LFABP蛋白可以形成正确的折叠,热稳定性检测结果表明 LFABP 蛋白在高温下具有较高的稳定性.结论 利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究脂肪酸结合蛋白 LFABP 的生物学特性、参与脂肪酸代谢调控及其机制研究、与药物的相互作用提供重要基础和研究依据,并将为相关疾病的治疗奠定基础.
目的 剋隆肝型脂肪痠結閤蛋白(LFABP)基因,構建其原覈錶達載體,併進行錶達、純化及鑒定.方法 採用聚閤酶鏈反應(PCR)方法從cDNA中擴增齣LFABP基因片段,通過酶切和連接,構建原覈錶達載體pET-m-LFABP,轉化入E.Coli BL21(DE3),經IPTG誘導錶達;應用親和層析、凝膠過濾層析和 Lipidex1000 凝膠層析分級純化目的蛋白.圓二色譜分析檢測目的蛋白的二級結構和熱穩定性.結果 SDS-PAGE 分析錶明,錶達產物的相對分子質量約為15×103,與理論值相一緻;應用親和層析、凝膠過濾層析和 Lipidex1000 凝膠層析分級純化目的蛋白,得到純度較高的蛋白.蛋白的圓二色譜分析錶明在大腸桿菌中錶達的LFABP蛋白可以形成正確的摺疊,熱穩定性檢測結果錶明 LFABP 蛋白在高溫下具有較高的穩定性.結論 利用大腸桿菌錶達繫統,穫得瞭較高純度的目的蛋白,為進一步研究脂肪痠結閤蛋白 LFABP 的生物學特性、參與脂肪痠代謝調控及其機製研究、與藥物的相互作用提供重要基礎和研究依據,併將為相關疾病的治療奠定基礎.
목적 극륭간형지방산결합단백(LFABP)기인,구건기원핵표체재체,병진행표체、순화급감정.방법 채용취합매련반응(PCR)방법종cDNA중확증출LFABP기인편단,통과매절화련접,구건원핵표체재체pET-m-LFABP,전화입E.Coli BL21(DE3),경IPTG유도표체;응용친화층석、응효과려층석화 Lipidex1000 응효층석분급순화목적단백.원이색보분석검측목적단백적이급결구화열은정성.결과 SDS-PAGE 분석표명,표체산물적상대분자질량약위15×103,여이론치상일치;응용친화층석、응효과려층석화 Lipidex1000 응효층석분급순화목적단백,득도순도교고적단백.단백적원이색보분석표명재대장간균중표체적LFABP단백가이형성정학적절첩,열은정성검측결과표명 LFABP 단백재고온하구유교고적은정성.결론 이용대장간균표체계통,획득료교고순도적목적단백,위진일보연구지방산결합단백 LFABP 적생물학특성、삼여지방산대사조공급기궤제연구、여약물적상호작용제공중요기출화연구의거,병장위상관질병적치료전정기출.
