世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2010年
16期
1643-1649
,共7页
陈国忠%姜海行%陆正峰%肖健%梁梓宇%覃山羽
陳國忠%薑海行%陸正峰%肖健%樑梓宇%覃山羽
진국충%강해행%륙정봉%초건%량재우%담산우
骨髓间充质干细胞%肝星状细胞%共培养%细胞凋亡%肝细胞生长因子%RohA
骨髓間充質榦細胞%肝星狀細胞%共培養%細胞凋亡%肝細胞生長因子%RohA
골수간충질간세포%간성상세포%공배양%세포조망%간세포생장인자%RohA
目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养对肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡和RohA表达的影响,探讨BMSCs旁分泌HGF在其中的作用机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠BMSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分4组:空白对照组、阴性对照组、BMSCs实验组、预处理实验组(c-met多克隆抗体预处理).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSCs细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PGR、Western blot检测BMSCs与HSCs共培养后HSCs内RohA mRNA和蛋白的表达.酶联免疫吸附法(ELISA)检测BMSCs与HSCs共培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)浓度.结果:BMSCs对HSCs增殖具有抑制作用,BMSCs与HSCs共培养后24 h、48 h的增殖抑制率分别为12.21%,35.43%,与空白对照组、实验对照组和C-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).Annexin-V-FITC/PI双染法检测BMSCs与HSCs共培养48 h后HSCs的凋亡率为25.80%,与空白对照组、实验对照组与c-met抗体预处理组比较有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h,BMSGs组RohA mRNA的表达抑制明显,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).BMSCs与HSCs共培养48 h RohA蛋白的表达明显抑制,且显著低于空白对照组、实验对照组与C-met抗体预处理组,有显著性差异(P<0.01).ELISA检测BMSCs与HSCs共培养24 h、48 h上清液中HGF浓度分别为250 ng/L与570 ng/L,明显高于单独BMSCs培养和单独HSCs培养,有显著性差异(P<0.01).结论:BMSCs与HSCs共培养能抑制HSCs的增殖,促进凋亡,抑制RohA表达,其机制可能是通过BMSCs旁分泌HGF发挥抑制大鼠HSCs增殖,促进凋亡的作用.
目的:觀察體外大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs)共培養對肝星狀細胞(HSCs)增殖、凋亡和RohA錶達的影響,探討BMSCs徬分泌HGF在其中的作用機製.方法:貼壁篩選法培養、純化SD大鼠BMSCs,傳代至第4代使用;大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)繫及纖維原細胞繫凍融後傳代使用.應用6孔塑料細胞培養盒,每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下雙層細胞共培養體繫,常規培養.實驗分4組:空白對照組、陰性對照組、BMSCs實驗組、預處理實驗組(c-met多剋隆抗體預處理).用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測HSCs細胞增殖能力;流式細胞儀檢測細胞凋亡;RT-PGR、Western blot檢測BMSCs與HSCs共培養後HSCs內RohA mRNA和蛋白的錶達.酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測BMSCs與HSCs共培養上清液中肝細胞生長因子(HGF)濃度.結果:BMSCs對HSCs增殖具有抑製作用,BMSCs與HSCs共培養後24 h、48 h的增殖抑製率分彆為12.21%,35.43%,與空白對照組、實驗對照組和C-met抗體預處理組比較有顯著性差異(P<0.01).Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測BMSCs與HSCs共培養48 h後HSCs的凋亡率為25.80%,與空白對照組、實驗對照組與c-met抗體預處理組比較有顯著性差異(P<0.01).BMSCs與HSCs共培養48 h,BMSGs組RohA mRNA的錶達抑製明顯,且顯著低于空白對照組、實驗對照組與C-met抗體預處理組,有顯著性差異(P<0.01).BMSCs與HSCs共培養48 h RohA蛋白的錶達明顯抑製,且顯著低于空白對照組、實驗對照組與C-met抗體預處理組,有顯著性差異(P<0.01).ELISA檢測BMSCs與HSCs共培養24 h、48 h上清液中HGF濃度分彆為250 ng/L與570 ng/L,明顯高于單獨BMSCs培養和單獨HSCs培養,有顯著性差異(P<0.01).結論:BMSCs與HSCs共培養能抑製HSCs的增殖,促進凋亡,抑製RohA錶達,其機製可能是通過BMSCs徬分泌HGF髮揮抑製大鼠HSCs增殖,促進凋亡的作用.
목적:관찰체외대서골수간충질간세포(BMSCs)공배양대간성상세포(HSCs)증식、조망화RohA표체적영향,탐토BMSCs방분비HGF재기중적작용궤제.방법:첩벽사선법배양、순화SD대서BMSCs,전대지제4대사용;대서간성상세포(HSC-T6)계급섬유원세포계동융후전대사용.응용6공소료세포배양합,매공사용반투막(transwell insert)건립상하쌍층세포공배양체계,상규배양.실험분4조:공백대조조、음성대조조、BMSCs실험조、예처리실험조(c-met다극륭항체예처리).용사갑기우담서람(MTT)법검측HSCs세포증식능력;류식세포의검측세포조망;RT-PGR、Western blot검측BMSCs여HSCs공배양후HSCs내RohA mRNA화단백적표체.매련면역흡부법(ELISA)검측BMSCs여HSCs공배양상청액중간세포생장인자(HGF)농도.결과:BMSCs대HSCs증식구유억제작용,BMSCs여HSCs공배양후24 h、48 h적증식억제솔분별위12.21%,35.43%,여공백대조조、실험대조조화C-met항체예처리조비교유현저성차이(P<0.01).Annexin-V-FITC/PI쌍염법검측BMSCs여HSCs공배양48 h후HSCs적조망솔위25.80%,여공백대조조、실험대조조여c-met항체예처리조비교유현저성차이(P<0.01).BMSCs여HSCs공배양48 h,BMSGs조RohA mRNA적표체억제명현,차현저저우공백대조조、실험대조조여C-met항체예처리조,유현저성차이(P<0.01).BMSCs여HSCs공배양48 h RohA단백적표체명현억제,차현저저우공백대조조、실험대조조여C-met항체예처리조,유현저성차이(P<0.01).ELISA검측BMSCs여HSCs공배양24 h、48 h상청액중HGF농도분별위250 ng/L여570 ng/L,명현고우단독BMSCs배양화단독HSCs배양,유현저성차이(P<0.01).결론:BMSCs여HSCs공배양능억제HSCs적증식,촉진조망,억제RohA표체,기궤제가능시통과BMSCs방분비HGF발휘억제대서HSCs증식,촉진조망적작용.
