四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2007年
4期
608-612
,共5页
刘朝晖%冯改丰%李月英%马延兵%胡海涛
劉朝暉%馮改豐%李月英%馬延兵%鬍海濤
류조휘%풍개봉%리월영%마연병%호해도
β淀粉样肽%主要免疫优势区%融合蛋白%免疫血清
β澱粉樣肽%主要免疫優勢區%融閤蛋白%免疫血清
β정분양태%주요면역우세구%융합단백%면역혈청
目的 研究β淀粉样肽(Aβ)与乙肝核心抗原主要免疫优势区(HbcAg/MIR)的融合蛋白(c-Aβ-c)在BL21/pET28原核表达体系的表达并进行腹腔内注射表达的融合蛋白免疫小鼠,检测免疫血清的免疫原性以及体外的生物学效应.方法 应用分子克隆技术构建原核表达质粒pET-28a/c-Aβ-c并进行c-Aβ-c融合基因在BL21菌的IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达的融合蛋白,用纯化的c-Aβ-c融合蛋白腹腔注射免疫动物,ELASA检测其抗Aβ抗体效价,MTT法和流式细胞术检测它应用于Alzheimer's disease(AD)转基因细胞的生物效应.结果 表达的c-Aβ-c融合蛋白主要以包涵体形式存在于细菌的沉淀中,表达水平占细菌总蛋白量的30%以上.免疫小鼠血清中抗Aβ抗体效价达1∶16000,抗血清抑制了AD转基因细胞中Aβ的神经细胞毒性,明显降低了细胞凋亡的比率.结论 c-Aβ-c融合蛋白具有良好的Aβ免疫原性,其动物免疫血清有效抑制Aβ肽的细胞毒性.
目的 研究β澱粉樣肽(Aβ)與乙肝覈心抗原主要免疫優勢區(HbcAg/MIR)的融閤蛋白(c-Aβ-c)在BL21/pET28原覈錶達體繫的錶達併進行腹腔內註射錶達的融閤蛋白免疫小鼠,檢測免疫血清的免疫原性以及體外的生物學效應.方法 應用分子剋隆技術構建原覈錶達質粒pET-28a/c-Aβ-c併進行c-Aβ-c融閤基因在BL21菌的IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析錶達的融閤蛋白,用純化的c-Aβ-c融閤蛋白腹腔註射免疫動物,ELASA檢測其抗Aβ抗體效價,MTT法和流式細胞術檢測它應用于Alzheimer's disease(AD)轉基因細胞的生物效應.結果 錶達的c-Aβ-c融閤蛋白主要以包涵體形式存在于細菌的沉澱中,錶達水平佔細菌總蛋白量的30%以上.免疫小鼠血清中抗Aβ抗體效價達1∶16000,抗血清抑製瞭AD轉基因細胞中Aβ的神經細胞毒性,明顯降低瞭細胞凋亡的比率.結論 c-Aβ-c融閤蛋白具有良好的Aβ免疫原性,其動物免疫血清有效抑製Aβ肽的細胞毒性.
목적 연구β정분양태(Aβ)여을간핵심항원주요면역우세구(HbcAg/MIR)적융합단백(c-Aβ-c)재BL21/pET28원핵표체체계적표체병진행복강내주사표체적융합단백면역소서,검측면역혈청적면역원성이급체외적생물학효응.방법 응용분자극륭기술구건원핵표체질립pET-28a/c-Aβ-c병진행c-Aβ-c융합기인재BL21균적IPTG유도표체,SDS-PAGE분석표체적융합단백,용순화적c-Aβ-c융합단백복강주사면역동물,ELASA검측기항Aβ항체효개,MTT법화류식세포술검측타응용우Alzheimer's disease(AD)전기인세포적생물효응.결과 표체적c-Aβ-c융합단백주요이포함체형식존재우세균적침정중,표체수평점세균총단백량적30%이상.면역소서혈청중항Aβ항체효개체1∶16000,항혈청억제료AD전기인세포중Aβ적신경세포독성,명현강저료세포조망적비솔.결론 c-Aβ-c융합단백구유량호적Aβ면역원성,기동물면역혈청유효억제Aβ태적세포독성.
