中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2008年
12期
934-938,插三
,共6页
向强%周跃%李长青%徐峰%吕宏琳%郑文杰
嚮彊%週躍%李長青%徐峰%呂宏琳%鄭文傑
향강%주약%리장청%서봉%려굉림%정문걸
RNA干扰%E381%神经细胞%轴突
RNA榦擾%E381%神經細胞%軸突
RNA간우%E381%신경세포%축돌
目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制神经元E3B1基因表达及其对轴突生长的影响.方法:选择针对E381(NCBI:NM-024397)RNAi的3个靶位点Abil1、Abil2、Abil3和1个不针对任何mRNA的RNAi靶位点(阴性对照)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH,阳性对照),用带有neoR选择标志和GFP绿色荧光标志的真核表达载体pGenesil-1构建E381 RNAi质粒,分别转染培养的神经元,在荧光显微镜下观测转染率,经G418筛选得到单一的转染细胞,并用Western blot法检测各转染组神经元E3B1蛋白的表达情况,选出具有最佳抑制效应的siRNA转染神经元,加人轴突生长抑制物,观测轴突生长情况.结果:成功构建了RNAi质粒,各组细胞的转染率相近,均为34%左右.与阴性对照组相比,Abil1、Abil2和Abil3转染组细胞内E3B1 mRNA的表达都受到了不同程度的抑制,其中Abil3转染组细胞的E381 mRNA和蛋白的表达抑制最为显著,加入轴突抑制剂后Abil3转染组神经元轴突仍能继续生长.结论:应用RNA干扰技术能高效特异地抑制神经元E3B1基因的表达,E3B1基因的表达下调可促进神经元轴突的生长.
目的:探討應用RNA榦擾(RNAi)技術抑製神經元E3B1基因錶達及其對軸突生長的影響.方法:選擇針對E381(NCBI:NM-024397)RNAi的3箇靶位點Abil1、Abil2、Abil3和1箇不針對任何mRNA的RNAi靶位點(陰性對照)以及甘油醛-3-燐痠脫氫酶(GAPDH,暘性對照),用帶有neoR選擇標誌和GFP綠色熒光標誌的真覈錶達載體pGenesil-1構建E381 RNAi質粒,分彆轉染培養的神經元,在熒光顯微鏡下觀測轉染率,經G418篩選得到單一的轉染細胞,併用Western blot法檢測各轉染組神經元E3B1蛋白的錶達情況,選齣具有最佳抑製效應的siRNA轉染神經元,加人軸突生長抑製物,觀測軸突生長情況.結果:成功構建瞭RNAi質粒,各組細胞的轉染率相近,均為34%左右.與陰性對照組相比,Abil1、Abil2和Abil3轉染組細胞內E3B1 mRNA的錶達都受到瞭不同程度的抑製,其中Abil3轉染組細胞的E381 mRNA和蛋白的錶達抑製最為顯著,加入軸突抑製劑後Abil3轉染組神經元軸突仍能繼續生長.結論:應用RNA榦擾技術能高效特異地抑製神經元E3B1基因的錶達,E3B1基因的錶達下調可促進神經元軸突的生長.
목적:탐토응용RNA간우(RNAi)기술억제신경원E3B1기인표체급기대축돌생장적영향.방법:선택침대E381(NCBI:NM-024397)RNAi적3개파위점Abil1、Abil2、Abil3화1개불침대임하mRNA적RNAi파위점(음성대조)이급감유철-3-린산탈경매(GAPDH,양성대조),용대유neoR선택표지화GFP록색형광표지적진핵표체재체pGenesil-1구건E381 RNAi질립,분별전염배양적신경원,재형광현미경하관측전염솔,경G418사선득도단일적전염세포,병용Western blot법검측각전염조신경원E3B1단백적표체정황,선출구유최가억제효응적siRNA전염신경원,가인축돌생장억제물,관측축돌생장정황.결과:성공구건료RNAi질립,각조세포적전염솔상근,균위34%좌우.여음성대조조상비,Abil1、Abil2화Abil3전염조세포내E3B1 mRNA적표체도수도료불동정도적억제,기중Abil3전염조세포적E381 mRNA화단백적표체억제최위현저,가입축돌억제제후Abil3전염조신경원축돌잉능계속생장.결론:응용RNA간우기술능고효특이지억제신경원E3B1기인적표체,E3B1기인적표체하조가촉진신경원축돌적생장.
