中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
43期
8454-8457
,共4页
刘瑞%张斌%刘星霞%朱希山%陈媛%豆晓伟%赵春华
劉瑞%張斌%劉星霞%硃希山%陳媛%豆曉偉%趙春華
류서%장빈%류성하%주희산%진원%두효위%조춘화
成体干细胞%可塑性%分化
成體榦細胞%可塑性%分化
성체간세포%가소성%분화
背景:关于成体干细胞可塑性机制的解释,目前多数学者接受的观点是多种组织器官内存在的成体干细胞其实并非均一的细胞群体,其中包含着更为原始的多潜能干细胞,但对于多潜能下细胞的起源、鉴别及其生物学特性仍缺乏了解.目的:探讨从成体组织中能否分离出一群具有独特表犁的更为原始的多潜能干细胞.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-01在北京协和医学院基础学院组织工程中心完成.材料:清洁级12.5～14.5 d BALB/C孕鼠10只.方法:无菌条件下打开BALB/C孕鼠子宫获取胚胎体壁组织,胰蛋白酶消化后贴壁法制成细胞悬液,接种后免疫磁珠分选Sca-1+CD117Lin 细胞群,当细胞达70%～80%融合时消化传代,取第5代细胞用于实验.主要观察指标:倒置相差显微镜和扫描电子显微镜观察该类细胞的显微和超微形态,通过牛长曲线和细胞周期观察其基本生长特性,采用流式细胞技术分析该群细胞免疫型,以RT-PCR法检测胚胎干细胞相关抗原的表达情况,通过Von Kossa染色、油红O染色、甲苯胺蓝染色及免疫细胞荧光染色观察其向三胚层细胞分化的潜能.结果:Sca-1+CD117 Lin细胞贴壁生长,呈纺锤或短梭形,可在体外快速稳定扩增50代以上;传代后3～7d为对数生长期,此后即进入平台期生长,倍增时间约为32 h,90.43%细胞处于G0/G1期.G2/M+S期的细胞比例为9.57%:细胞表刮稳定,高表达Sca-1,不表达CD117,CD14,CD19,CD31,CD34,CD45和Flk-1,中度表达CD44:胚胎干细胞相关抗原Sox2,Oct-4及Nanog均呈阳性表达:诱导分化实验表明该细胞可以向中胚层来源的成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、外胚层来源的神经胶质细胞以及内胚层来源的肝细胞分化.结论:从成体组织内可以分离出Sca-1+CD117 Lin 细胞群,其表达胚胎干细胞相关抗原,能够向三胚层分化,是一群更为原始的多潜能成体干细胞.
揹景:關于成體榦細胞可塑性機製的解釋,目前多數學者接受的觀點是多種組織器官內存在的成體榦細胞其實併非均一的細胞群體,其中包含著更為原始的多潛能榦細胞,但對于多潛能下細胞的起源、鑒彆及其生物學特性仍缺乏瞭解.目的:探討從成體組織中能否分離齣一群具有獨特錶犛的更為原始的多潛能榦細胞.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2007-03/2008-01在北京協和醫學院基礎學院組織工程中心完成.材料:清潔級12.5～14.5 d BALB/C孕鼠10隻.方法:無菌條件下打開BALB/C孕鼠子宮穫取胚胎體壁組織,胰蛋白酶消化後貼壁法製成細胞懸液,接種後免疫磁珠分選Sca-1+CD117Lin 細胞群,噹細胞達70%～80%融閤時消化傳代,取第5代細胞用于實驗.主要觀察指標:倒置相差顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察該類細胞的顯微和超微形態,通過牛長麯線和細胞週期觀察其基本生長特性,採用流式細胞技術分析該群細胞免疫型,以RT-PCR法檢測胚胎榦細胞相關抗原的錶達情況,通過Von Kossa染色、油紅O染色、甲苯胺藍染色及免疫細胞熒光染色觀察其嚮三胚層細胞分化的潛能.結果:Sca-1+CD117 Lin細胞貼壁生長,呈紡錘或短梭形,可在體外快速穩定擴增50代以上;傳代後3～7d為對數生長期,此後即進入平檯期生長,倍增時間約為32 h,90.43%細胞處于G0/G1期.G2/M+S期的細胞比例為9.57%:細胞錶颳穩定,高錶達Sca-1,不錶達CD117,CD14,CD19,CD31,CD34,CD45和Flk-1,中度錶達CD44:胚胎榦細胞相關抗原Sox2,Oct-4及Nanog均呈暘性錶達:誘導分化實驗錶明該細胞可以嚮中胚層來源的成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、外胚層來源的神經膠質細胞以及內胚層來源的肝細胞分化.結論:從成體組織內可以分離齣Sca-1+CD117 Lin 細胞群,其錶達胚胎榦細胞相關抗原,能夠嚮三胚層分化,是一群更為原始的多潛能成體榦細胞.
배경:관우성체간세포가소성궤제적해석,목전다수학자접수적관점시다충조직기관내존재적성체간세포기실병비균일적세포군체,기중포함착경위원시적다잠능간세포,단대우다잠능하세포적기원、감별급기생물학특성잉결핍료해.목적:탐토종성체조직중능부분리출일군구유독특표리적경위원시적다잠능간세포.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-03/2008-01재북경협화의학원기출학원조직공정중심완성.재료:청길급12.5～14.5 d BALB/C잉서10지.방법:무균조건하타개BALB/C잉서자궁획취배태체벽조직,이단백매소화후첩벽법제성세포현액,접충후면역자주분선Sca-1+CD117Lin 세포군,당세포체70%～80%융합시소화전대,취제5대세포용우실험.주요관찰지표:도치상차현미경화소묘전자현미경관찰해류세포적현미화초미형태,통과우장곡선화세포주기관찰기기본생장특성,채용류식세포기술분석해군세포면역형,이RT-PCR법검측배태간세포상관항원적표체정황,통과Von Kossa염색、유홍O염색、갑분알람염색급면역세포형광염색관찰기향삼배층세포분화적잠능.결과:Sca-1+CD117 Lin세포첩벽생장,정방추혹단사형,가재체외쾌속은정확증50대이상;전대후3～7d위대수생장기,차후즉진입평태기생장,배증시간약위32 h,90.43%세포처우G0/G1기.G2/M+S기적세포비례위9.57%:세포표괄은정,고표체Sca-1,불표체CD117,CD14,CD19,CD31,CD34,CD45화Flk-1,중도표체CD44:배태간세포상관항원Sox2,Oct-4급Nanog균정양성표체:유도분화실험표명해세포가이향중배층래원적성골세포、지방세포、연골세포、외배층래원적신경효질세포이급내배층래원적간세포분화.결론:종성체조직내가이분리출Sca-1+CD117 Lin 세포군,기표체배태간세포상관항원,능구향삼배층분화,시일군경위원시적다잠능성체간세포.
