生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
51-54
,共4页
李时君%张春燕%李佩珊%陈妍%孙文%李方和
李時君%張春燕%李珮珊%陳妍%孫文%李方和
리시군%장춘연%리패산%진연%손문%리방화
亲和层析%抗原性衰减%单克隆抗体%乙型肝炎病毒%表面抗原%免疫逃逸变异
親和層析%抗原性衰減%單剋隆抗體%乙型肝炎病毒%錶麵抗原%免疫逃逸變異
친화층석%항원성쇠감%단극륭항체%을형간염병독%표면항원%면역도일변이
目的:探讨G145R rHBsAg抗原衰减对抗体亲和纯化的影响与意义.方法:采用抗野生重组HBs G6-McAb制备层析载体,对含rG145R HBsAg的2A8细胞上清做亲和层析.以SDS-PAGE、Western Blot及ELISA等对产物纯度、含量及回收率进行评价,并与同法纯化之野生HBsAg进行比较.结果:梯度洗脱层析显示G145R rHBsAg、自然表达野生HBsAg及其r-wHBsAg三者纯化产物的纯度分别为90.3%、95.2%及93.1%;回收率为43.3%、72.0%及66.4%,其亲和洗脱峰型前者较后两者略宽,主峰前部出现明显顿挫;pH线性梯度洗脱显示,G145R rHBsAg洗脱曲线主峰较前梯度洗脱进一步增宽,顿挫更为明显,并在主峰前出现一低平的蛋白峰.ELISA检测显示HBsAg活性贯穿主峰始终,SDS-PAGE与Weistern blot显示两法洗脱产物纯度(92.5%与89.3%)大致相似,分子大小与野生HBsAg相同.结论:洗脱峰加宽与顿挫作为G145R rHBsAg抗原性渐进性衰减的特征性表现,在同类生物材料实验性制备与产品考评中有一定参考价值.
目的:探討G145R rHBsAg抗原衰減對抗體親和純化的影響與意義.方法:採用抗野生重組HBs G6-McAb製備層析載體,對含rG145R HBsAg的2A8細胞上清做親和層析.以SDS-PAGE、Western Blot及ELISA等對產物純度、含量及迴收率進行評價,併與同法純化之野生HBsAg進行比較.結果:梯度洗脫層析顯示G145R rHBsAg、自然錶達野生HBsAg及其r-wHBsAg三者純化產物的純度分彆為90.3%、95.2%及93.1%;迴收率為43.3%、72.0%及66.4%,其親和洗脫峰型前者較後兩者略寬,主峰前部齣現明顯頓挫;pH線性梯度洗脫顯示,G145R rHBsAg洗脫麯線主峰較前梯度洗脫進一步增寬,頓挫更為明顯,併在主峰前齣現一低平的蛋白峰.ELISA檢測顯示HBsAg活性貫穿主峰始終,SDS-PAGE與Weistern blot顯示兩法洗脫產物純度(92.5%與89.3%)大緻相似,分子大小與野生HBsAg相同.結論:洗脫峰加寬與頓挫作為G145R rHBsAg抗原性漸進性衰減的特徵性錶現,在同類生物材料實驗性製備與產品攷評中有一定參攷價值.
목적:탐토G145R rHBsAg항원쇠감대항체친화순화적영향여의의.방법:채용항야생중조HBs G6-McAb제비층석재체,대함rG145R HBsAg적2A8세포상청주친화층석.이SDS-PAGE、Western Blot급ELISA등대산물순도、함량급회수솔진행평개,병여동법순화지야생HBsAg진행비교.결과:제도세탈층석현시G145R rHBsAg、자연표체야생HBsAg급기r-wHBsAg삼자순화산물적순도분별위90.3%、95.2%급93.1%;회수솔위43.3%、72.0%급66.4%,기친화세탈봉형전자교후량자략관,주봉전부출현명현돈좌;pH선성제도세탈현시,G145R rHBsAg세탈곡선주봉교전제도세탈진일보증관,돈좌경위명현,병재주봉전출현일저평적단백봉.ELISA검측현시HBsAg활성관천주봉시종,SDS-PAGE여Weistern blot현시량법세탈산물순도(92.5%여89.3%)대치상사,분자대소여야생HBsAg상동.결론:세탈봉가관여돈좌작위G145R rHBsAg항원성점진성쇠감적특정성표현,재동류생물재료실험성제비여산품고평중유일정삼고개치.
