CAJ | 학술논문

目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法.方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力.结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力.结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率.
목적:연합응용다충기술평개불동방식제비적TAT전도결구역-eGFP-목적단백적천막효솔급아세포정위정황,이기건립유효、은정적고효천막단백제비방법.방법:유도표체、순화포함체형식융합단백,분별진행직접탈염화투석복성,병여세포공육,연후통과류식세포술、격광공취초현미경급면역인적법평개융합단백천막능력.결과:통과투석복성제비적융합단백천막효솔겁저;이순화후직접탈염적융합단백경류식세포술、격광공취초현미경급면역인적등방법분석,표명균구유고효천막능력.결론:량충방식제비적융합단백균능천막,단투석복성제비적단백천막효솔저,차불역정위우세포핵중,영향진일보대해목적단백재포핵중생물학행위적연구;이탈염적변성단백구유고효적천막효솔.