CAJ | 학술논문

[目的]构建肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因重组腺病毒载体.[方法]首先利用现有的腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShuttle-CMV,构建新的不带CMV增强子/启动子而带有polyA加尾信号穿梭质粒,命名为pShuttle2.将AFP增强子、启动子及SEA基因分别从已构建的pKS-EP载体和pMDl8-T-SEA载体上,亚克隆至pShuttle2中,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183.以获得的重组子转染HEK293细胞后制备重组腺病毒,然后感染高表达AFP的肝癌细胞系Hepal-6和不表达AFP的黑色素瘤细胞系B16、成纤维细胞系NIH3T3.采用间接免疫荧光法,经荧光显微镜观察和流式细胞术检测SEA在细胞膜表面的表达.采用3H掺入法检测膜表达的SEA体外诱导淋巴细胞增殖的活性.[结果]SEA能够靶向性地表达在高表达AFP的Hepal-6细胞膜上,在不表达AFP的B16、NIH3T3细胞膜上不表达,并且体外能够诱导淋巴细胞增殖.[结论]成功地构建了肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体,为进一步研究SEA在肝癌靶向基因治疗中的应用及其抗肿瘤免疫机制奠定了基础.
[목적]구건간암파향성포도구균장독소A(SEA)기인중조선병독재체.[방법]수선이용현유적선병독천사질립pShuttle화pShuttle-CMV,구건신적불대CMV증강자/계동자이대유polyA가미신호천사질립,명명위pShuttle2.장AFP증강자、계동자급SEA기인분별종이구건적pKS-EP재체화pMDl8-T-SEA재체상,아극륭지pShuttle2중,재여선병독골가질립pAdEasy-1공전화E.coli BJ5183.이획득적중조자전염HEK293세포후제비중조선병독,연후감염고표체AFP적간암세포계Hepal-6화불표체AFP적흑색소류세포계B16、성섬유세포계NIH3T3.채용간접면역형광법,경형광현미경관찰화류식세포술검측SEA재세포막표면적표체.채용3H참입법검측막표체적SEA체외유도림파세포증식적활성.[결과]SEA능구파향성지표체재고표체AFP적Hepal-6세포막상,재불표체AFP적B16、NIH3T3세포막상불표체,병차체외능구유도림파세포증식.[결론]성공지구건료간암파향성SEA기인중조선병독재체,위진일보연구SEA재간암파향기인치료중적응용급기항종류면역궤제전정료기출.