CAJ | 학술논문

目的:构建含有甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因的DNA疫苗双表达载体,为研究甲型通用流感疫苗奠定基础.方法:将甲型流感病毒(H1N1)接种鸡胚后收获尿囊液,提取流感病毒总RNA,RT-PCR法扩增M2基因;将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因插入到质粒pVAXI多克隆位点,再将M2基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点,构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,酶切鉴定后测序;脂质体法转染COS7细胞并检测目的蛋白的表达.结果:成功扩增出M2基因(约300 bp)、IRES基因(约580 bp)和GM-CSF基因(约400 bp),酶切鉴定结果表明构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,Western blotting检测证明流感病毒M2蛋白的表达.结论:成功构建出流感病毒DNA疫苗双表达载体pMIG.
목적:구건함유갑형류감병독M2기인여GM-CSF기인적DNA역묘쌍표체재체,위연구갑형통용류감역묘전정기출.방법:장갑형류감병독(H1N1)접충계배후수획뇨낭액,제취류감병독총RNA,RT-PCR법확증M2기인;장미소병독내부핵당체진입위점(IRES)기인삽입도질립pVAXI다극륭위점,재장M2기인화GM-CSF기인의차극륭도IRES적상、하유다극륭위점,구건출갑형류감병독쌍표체재체pMIG,매절감정후측서;지질체법전염COS7세포병검측목적단백적표체.결과:성공확증출M2기인(약300 bp)、IRES기인(약580 bp)화GM-CSF기인(약400 bp),매절감정결과표명구건출갑형류감병독쌍표체재체pMIG,Western blotting검측증명류감병독M2단백적표체.결론:성공구건출류감병독DNA역묘쌍표체재체pMIG.