CAJ | 학술논문

目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子.将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用.方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子.扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体.瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O3环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照.检测荧光素酶的相对活性.结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达.结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作.
목적:장구유결양조공작용적다충결양반응원건(HRE)여CMV계동자조합,이획득결양응답계동자.장형광소매보고기인치우결양응답계동자적하유,통과검측형광소매활성적방법,방편지연구결양응답계동자결양유도적작용.방법:합성다충HRE핵감산서렬,병설립HRE돌변대조,극륭입pCI-neo중,구건HRE/CMV계동자.확증HRE/CMV서렬,정향아극륭입pGL3-Basic중,획득HRE/CMV형광소매보고재체.순시전염HeLa세포,재0.1%O3배경하배양세포,병설립정상양분압배경대조.검측형광소매적상대활성.결과:성공구건료HRE/CMV형광소매보고재체,기중mPGK-HRE/CMV재체표현출흔호적결양유도작용화고수평적표체.결론:mPGK-HRE/CMV계동자능구유효지진행결양유도화조공공작.