武汉大学学报（理学版）
武漢大學學報（理學版）
무한대학학보（이학판）
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
4期
481-484
,共4页
杨振华%陶攀%周思榆%吴叔文%潘兹书
楊振華%陶攀%週思榆%吳叔文%潘玆書
양진화%도반%주사유%오숙문%반자서
禽流感病毒%H5N1亚型%神经氨酸酶%抗体
禽流感病毒%H5N1亞型%神經氨痠酶%抗體
금류감병독%H5N1아형%신경안산매%항체
以禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NA基因全长cDNA克隆pMD-NA为模板,PCR扩增第406位至第1 353位基因片段.克隆到pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-28/ΔNA,转化大肠杆菌,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot分析证实,截短的NA重组蛋白获得高效表达.采用SDS-PAGE纯化重组蛋白,免疫家兔,制备特异性神经氨酸酶(NA)抗体.ELISA及间接免疫荧光检测结果显示,该抗体效价在1∶1×105以上,能与在大肠杆菌和Vero细胞中表达的NA蛋白产生特异性反应.纯化的NA重组蛋白可用作建立禽流感检测方法的诊断抗原,所制备NA抗体可用于检测禽流感基因工程疫苗中的NA抗原组分.
以禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NA基因全長cDNA剋隆pMD-NA為模闆,PCR擴增第406位至第1 353位基因片段.剋隆到pET-28a錶達載體,構建重組質粒pET-28/ΔNA,轉化大腸桿菌,用異丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白錶達,SDS-PAGE和Western blot分析證實,截短的NA重組蛋白穫得高效錶達.採用SDS-PAGE純化重組蛋白,免疫傢兔,製備特異性神經氨痠酶(NA)抗體.ELISA及間接免疫熒光檢測結果顯示,該抗體效價在1∶1×105以上,能與在大腸桿菌和Vero細胞中錶達的NA蛋白產生特異性反應.純化的NA重組蛋白可用作建立禽流感檢測方法的診斷抗原,所製備NA抗體可用于檢測禽流感基因工程疫苗中的NA抗原組分.
이금류감병독A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NA기인전장cDNA극륭pMD-NA위모판,PCR확증제406위지제1 353위기인편단.극륭도pET-28a표체재체,구건중조질립pET-28/ΔNA,전화대장간균,용이병기β류대반유당감(IPTG)유도중조단백표체,SDS-PAGE화Western blot분석증실,절단적NA중조단백획득고효표체.채용SDS-PAGE순화중조단백,면역가토,제비특이성신경안산매(NA)항체.ELISA급간접면역형광검측결과현시,해항체효개재1∶1×105이상,능여재대장간균화Vero세포중표체적NA단백산생특이성반응.순화적NA중조단백가용작건립금류감검측방법적진단항원,소제비NA항체가용우검측금류감기인공정역묘중적NA항원조분.
